PD-L1免疫荧光检查

时间:2023年07月18日 来源:

荧光抗体技术:抗原抗体反应后,利用荧光显微镜判定结果的检测方法。免疫荧光测定:抗原抗体反应后,利用特殊仪器测定荧光强度而推算被测物浓度的检测方法。免疫荧光实验步骤:直接法测抗原:基本原理:将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少。缺点是敏感性偏低;而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。此法常用于细菌、病毒等微生物的快速检查和肾炎活检、皮肤活检的免疫病理检查。荧光抗体技术可用于检测和定位各种抗原,也可以用于检测和定位抗体。PD-L1免疫荧光检查

PD-L1免疫荧光检查,免疫

细胞免疫荧光:细胞种板与细胞爬片制备:1) 细胞密度在90%-95%左右,用预热胰酶消化细胞后重悬细胞于完全培养基中,充分吹打,使之成单细胞悬液,计数。2)取细胞培养12孔板,在每个孔放爬片的位置根据爬片的大小,先在每个孔里准备放爬片的位置滴几滴培养基,然后将爬片置于液滴上,压紧,使爬片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起,防止加细胞悬液时爬片漂起,造成双层细胞贴片。根据自己的需要选择合适的细胞密度种入12孔板培养板内。3)24h或者48h后,根据细胞生长速度快慢,观察判断细胞密度,约90%时进行细胞免疫荧光。Tyrosine Hydroxylase(TH)免疫组化免疫荧光技术在生物医学研究中具有普遍的应用前景。

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荧光的猝灭:荧光分子的辐射能力在受到激发光较长时间的照射后会减弱甚至猝灭,这是由于激发态分子的电子不能回复到基态,所吸收的能量无法以荧光的形式发射。一些化合物有天然的荧光猝灭作用而被用作猝灭剂,以消除不需用的荧光。因此荧光物质的保存应注意避免光(特别是紫外光)的直接照射和与其他化合物的接触。在荧光抗体技术中常用一些非荧的色素物质如亚甲蓝、碱性复红。伊文思蓝或低浓度的过锰酸钾、碘溶液等对标本进行得当复染,以减弱非特异性荧光本质,使特异荧光更突出显示。

其他荧光物质:1.酶作用后产生荧光的物质某些化合物本身无荧光效应,一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮,后者可发出荧光,激发光波长为360nm,发射光波长为450nm。其他如碱性酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基乙酸等。2.镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕(Eu3+)、铽(Tb3+)、铈(Ce3+)等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光,其中以Eu3+应用较广。Eu3+螯合物的激发光波长范围宽,发射光波长范围窄,荧光衰变时间长,较适合用于分辨荧光免疫测定。所需要的仪器:荧光显微镜、显微荧光分光光度计、流式细胞仪和时间分辨荧光计等仪器激光共聚焦显微镜。免疫荧光技术是一种以荧光素标记抗体来定位抗原物质的高度发达的标记免疫技术。

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免疫荧光检测相对于酶检测的优势:定量荧光信号的能力(与使用基于酶的方法进行的定性测定相反);复用能力(可以结合不同发射光谱的荧光染料来检测多种蛋白质);荧光染料的光稳定性。免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(黄绿色或橘红色),可以看见荧光所在的组织细胞,从而确定抗原或抗体的性质、定位,以及利用定量技术测定含量。免疫荧光技术可以通过荧光信号显示和检查细胞或组织内的抗原或半抗原物质。Tyrosine Hydroxylase(TH)免疫组化

免疫荧光技术可以用于研究代谢疾病和内分泌系统的功能。PD-L1免疫荧光检查

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。在此基础上又分为两种方法:直接法和间接法。直接法:将标记的特异性荧光抗体直接加到抗原上,经过一定时间反应,即可结合并显色。间接法:先用抗原的抗体(一抗)与抗原反应结合,再用荧光标记的二抗(一抗的抗体)与抗原反应,形成抗体-抗原-抗体复合物。PD-L1免疫荧光检查

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