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品名:0.25%胰蛋白酶溶液,1X分类:细胞消化试剂规格:100ML用途:消化试剂,如胰蛋白酶,被用于将粘附细胞从其附着的表面或底物上分离和降解,以及将组织进行游离,以开展原代细胞培养。产品包括2种常用浓度的γ照射猪胰蛋白酶(1:250)以及一种新型非哺乳动物猪胰蛋白酶替代品,称为ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一种蛋白水解酶和胶原水解酶的混合超滤溶液,可以快速消化,同时不损伤细胞。其非哺乳动物配方使它适用于无血清应用,不需要失效或对酶抑制剂。此试剂可使细胞被快速分离,形成单细胞悬浮物,保持高细胞活力,并使传代时的变异减至**小。胰蛋白酶属于其中一种活性成分,主要用于促进消化吸收。云南EDTA胰酶供应商家
冰冻保存,但不得反复冻融。供试品溶液的制备取本品适量,精密称定,加。测定法取底物溶液、(pH)1ml,混匀,作为空白。取供试品溶液(预热至25℃±℃),立即计时并摇匀,使比色池内的温度保持在25℃±℃,照紫外-可见分光光度法(2010年版*典二部附录ⅣA),在237nm的波长处,每隔30秒读取吸光度,共5分钟,每30秒钟吸光度的变化率应恒定,且恒定时间不得少于3分钟。以吸光度为纵坐标,时间为横坐标,作图,取在3分钟内成直线部分的吸光度,按下式计算。式中P为每2500胰蛋白酶单位中含糜蛋白酶的量,单位;A2为直线上开始的吸光度;A1为直线上终止的吸光度;T为A2至A1读数的时间,分;W为测定液中含供试品的量,mg;,吸光度每分钟改变,即相当于1个糜蛋白酶单位。每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。干燥失重取本品适量,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥4小时,减失重量不得过(2010年版*典二部附录ⅧL)。胰蛋白酶效价测定底物溶液的制备取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐,加水溶解使成100ml,作为底物原液;取10ml,用磷酸盐缓冲液(取,pH值为)稀释成100ml,照紫外-可见分光光度法(2010年版*典二部附录ⅣA),恒温于℃±℃,以水作空白。福建国产胰酶价格查询消化液经过过滤除菌,可以直接用于培养细胞的消化,或者一些组织的消化。
胰蛋白酶:(Trypsin)为蛋白酶的一种,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。由223个氨基酸残基组成的单链多肽,主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品计算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500单位。作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在pH为、温度为37℃时,胰酶溶液的作用能力**强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。终止消化时,可用含有血清培养液终止胰酶对细胞的作用。有些细胞容易消化(如鸡胚原代成纤维细胞)可用胰酶进行消化,可以不加EDTA。
先用少许**过的PBS调成糊状,然后补足到100ml。置室温搅拌4小时或冰箱内过夜,过滤**,分装,4℃保存备用。);或是hanks或是D-hanks液配制(1.称取胰蛋白酶粉末置烧杯中,先用少许D-Hanks平衡盐溶液(左右)调成糊状,然后再补足D-Hanks平衡盐溶液,搅拌混匀,置室温4小时或冰箱过夜,并不断搅拌振荡;2.次日,先用滤纸粗滤,再进行过滤**,分装入瓶中,低温冰箱保存备用,常用浓度为或。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH至左右。)一般**,至于作用效果,需要消化一次细胞感觉一下,因为不同厂家的酶不一样,有的作用温和,有的作用剧烈。4、是否需要四度放置过夜,取决于你的胰酶的纯度。过去的胰酶纯度不高,所以难以溶解,需要四度过夜.而现在的胰酶纯度都很高,就没有必要四度过夜。从理论上来说,四度放置过夜,给**生长的机会,尽管过滤可以出去**,可是出不掉其代谢产物。胰蛋白酶不溶,有絮状物的原因,考虑有:1、过期或是酶已经部分变性2、溶液ph值不对3、在没过滤之前的絮状沉淀是正常现象,因胰酶多取自动物胰腺,沉淀为**块。胰蛋白酶是一种动物源性产品,是培养细胞过程中常用的酶。
细胞培养胰蛋白酶生物制品简介中文名称:胰蛋白酶中文同义词:胰蛋白酶;胰蛋白酶1:250(猪胰脏);胰蛋白酶1:300(猪胰脏);胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶类英文名称:Trypsin英文同义词:TRYPSIN;TRYPSIN,1-250;TRYPSIN,1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN,HUMANPANCREAS;TRYPSINPORCINE;TRYPSIN,PORCINEPANCREAS;CAS号:9002-07-7分子式:C6H15O12P3分子量:≈24000EINECS号:232-650-8胰蛋白酶物化性质胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取,纯化获得的结晶,再制成的冻干制剂。易溶于水,不溶于三氯甲烷、乙醇、**等有机溶剂。在,短时间煮沸几乎不失活;在碱溶液中加热则变性沉淀,Ca2+有保护和***作用,胰蛋白酶的等电点为。牛胰蛋白酶原有229个氨基酸组成,含6对二硫键,其氨基酸排列顺序和晶体结构已被阐明。在肠激酶活自身催化下,酶原的N末端赖氨酸与异亮氨酸残基之间的肽键被水解,释放出来缬-天-天-天-天-赖6肽,生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸残基223个,分子量23800[2],活性部位的丝氨酸残基是不可缺少的丝氨酸蛋白酶。猪胰蛋白酶的化学结构与牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸残基排列顺序中,只有41个氨基酸残基不同。如果消化液中含有胰酶和EDTA,好去除。重庆重组胰酶市场报价
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胰酶操作步骤:
(*供参考) :1. 吸取培养基,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以除去残余的血清。2. 加入适量的胰蛋白酶消化液,略盖过细胞即可。根据细胞的特性可以增加或减少胰酶用量,室温放置30秒至2分钟。(不同的细胞消化时间有所不同)3. 显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状;或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。4. 此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。 云南EDTA胰酶供应商家
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