北京外泌体miRNA测序

l 慢病毒介导CD63-GFP表达：将外泌体的特定蛋白CD63和绿色荧光蛋白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中，随后用此慢病毒传播细胞，使细胞分泌的外泌体带有绿色荧光。外泌体功能研究：将标记的外泌体加入受体细胞培养基中，与受体细胞进行共培养，观察细胞的功能变化，如细胞增殖、迁移与侵袭、细胞凋亡等；或者将外泌体注射入动物模型中，观察动物表型变化和检测动物相关指标。外泌体（exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜，直径大约为 30-150 nm。外泌体普遍存在并分布于各种体液中，携带和传递重要的信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统，影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。外泌体无法分析外泌体具有的生理功能，也是两种提取方法的问题所在。北京外泌体miRNA测序

外泌体作为药物递送载体较以往的合成系统具有多方面的优势，比如：人工递送载体具有更低的免疫原性，其含有的磷脂双分子层可与靶细胞细胞膜融合，从而避廉价核巨噬细胞系统的吞噬作用。Srivastava等开发了一种基于外泌体-金奈米粒子（Exo-GNP）的药物递送系统—“nanosomes”用于肺病的医治，研究表明该系统与单用多柔比星医治相比，前者的多柔比星释放量增加、摄取率提高、化疗毒性降低且化疗效果增强。此外，还有研究发现，使用外泌体运载紫杉醇（PTX）可显着提高病细胞对PTX的吸收，将PTX加载至外泌体中显着增加了药物细胞毒性，Exo-PTX能显着压制肺病的发展。北京外泌体miRNA测序日本和光着眼于巨噬细胞的外泌体受体Tim4蛋白，制备Tim4细胞外域与磁珠结合的“Tim4磁珠”。

理论上，所有促进肺病细胞分泌外泌体的机制都可以被用来作为肺病医治的潜在靶点，但目前关于其可行性的研究还比较少。有研究表明，种瘤来源的外泌体对种瘤免疫的调控具有一定的影响作用，包括免疫压制和免疫开启两个方面。Romagnoli等研究发现，肺病细胞可以刺激树突状细胞等抗原提呈细胞产生携带特异抗原的外泌体，这些外泌体可以迁移到区域淋巴结，进而开启CD4+T与CD8+T细胞产生抗种瘤免疫反应，进而压制种瘤生长。Besse等研究发现，在晚期NSCLC患者中，装载有IFN-γ，MHC I和MHCⅡ限制抗原的树突状细胞外泌体增强了NK细胞的抗种瘤免疫功能，研究证实外泌体参与相关种瘤生理病理过程，在NSCLC免疫医治中有着重要的临床应用价值，为NSCLC的医治打开了新的视野。

几乎所有类型的细胞都可以分泌外泌体，同时外泌体也普遍存在于体液中，包括血液、眼泪、尿液、唾液、乳汁、腹水等。目前研究发现外泌体中富含核酸（microRNA、lncRNA、circRNA、mRNA、tRNA等）、蛋白、胆固醇等。外泌体的表面marker主要有CD63、CD81、CD9、TSG101、HSP27等。目前对于外泌体的鉴定主要有四种方法：透射电子显微镜（TEM）、Nanosight、Western Blot、流式细胞术。近年来，随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及种瘤医治领域、医学基础和免疫领域、寄生虫领域；临床研究上已涉及心血管系统、内分泌代谢系统等。从症状患者树突状细胞释放的外泌体中，含有各种症状细胞来源的蛋白质。

外泌体（Exosome）是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中；外泌体携带有多种蛋白质、脂类、RNA等重要信息，不只在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用，更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。外泌体（Exosomes）是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。外泌体普遍存在于细胞培养上清以及各种体液中，包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等，同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。外泌体其纯度与超离心法和PEG沉淀法提取外泌体做比较。北京外泌体miRNA测序

外泌体是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。北京外泌体miRNA测序

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中，RAB7 和 RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。北京外泌体miRNA测序