安徽细胞外泌体示踪

从细胞培养物中富集的总外泌体（使用“总外泌体分离”试剂或超速离心）可以通过免疫磁珠捕获进一步纯化特定的亚群。使用基于Dynabeads的CD9、CD63、CD81或EpCam特异性试剂，或将链霉亲和素试剂与您选择的生物素化抗体结合，以基于表面抗原，纯化所有群体。外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现， 1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中 。外泌体的检测和提取还遇到一个困难即：对各种外泌体的分类。安徽细胞外泌体示踪

外泌体普遍参与细胞间物质运输与信息传递，调控细胞生理活动。同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进种瘤发生和转移等作用；此外，外泌体还可以作为“天然的纳米粒子”来进行药物递送。外泌体相关数据库有哪些？l exoRBase数据库收集和描述人类血液外泌体中所有长的RNA，包括circRNA、lncRNA和mRNA。l EVpedia和Vesiclepedia数据库汇总了不同囊泡研究中发现的蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。l ExoCarta数据库主要收录了包括人、大鼠、小鼠、绵羊等几个物种的286个研究结果，涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂类等信息。安徽细胞外泌体示踪外泌体提纯方法中，超速离心法和聚合物沉淀法（市售试剂盒）混入多种杂质。

l 亲脂染料标记外泌体：目前已发表的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，体内和体外都有较多应用。亲脂性染料主要分为两大类，一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较普遍。第二类是Di系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，在活成像中用来示踪。

细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。这些细胞外囊泡（EVs）表示了细胞间通讯的一个重要模式，作为膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA细胞之间传递的载体。泌体是细胞内源性的小囊泡，由大多数细胞分泌。在抗原呈递细胞中的外泌体发挥作用的报道后，人们对外泌体的兴趣增强，并且观察到它们可以在体内刺激免疫应答。在过去几年中，有几个实验室报道了各种细胞类型的外泌体分泌，并讨论了其潜在的生物学功能。然而，我们对于EV形成的分子机制知识的缺乏以及缺乏干扰货物包装或囊泡释放的方法仍然妨碍了其在体内生理相关性的探索。这篇综述专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制。必须慎重分析得到的是否是外泌体。

外泌体中这些物质的结构与它们在分泌细胞内的结构不同，所以可能存在一种外泌体特异蛋白和mRNA/miRNA在外泌体内选择性积累的机制。这种特异性可将外泌体内的RNA作为生物标记，更进一步作为医治开发方法的靶点。外泌体中的mRNA一旦被靶细胞吞噬，能够引起这个细胞内的功能性蛋白的表达，但外泌体中多数的miRNA是前体而非功能性miRNA，这些miRNA起着何种生理性意义，学者们正在研究。由于外泌体含有各种蛋白质、RNA和脂质，研究人员正将其进行细胞分类，建立数据库（ExoCarta）。此外，在世界各地分别进行着运用蛋白质组学、转录组学和系统生物学的大规模分析工作，而FunRich的EV plugin作为一种通用的分析手段已被公布出来。今后，在推进外泌体研究方面，各领域的研究人员信息共享至关重要。外泌体给后续实验产生了许多障碍。安徽细胞外泌体示踪

外泌体膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。安徽细胞外泌体示踪

全自动外泌体荧光检测分析系统能够在单个外泌体样本上检测多达4种标记物，并同时提供外泌体的其它表征数据诸如计数、颗粒尺寸统计等。建议在表征外泌体和外囊泡时，应当同时测量表面和载体蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌体，探测膜内蛋白和载体。并且单次可定量3种表面、管腔蛋白。全自动外泌体荧光检测分析系统只测量含有靶标抗原的特定细胞外泌体群体。只需35 μL的稀释样品，即可直接获得外泌体的表型、粒径和计数信息。并且无需担心污染物对测试的影响。安徽细胞外泌体示踪