成都透射电镜检测自噬
生理条件下,FUNDC1的Tyr18和Ser13分别被肉瘤基因家族的酪氨酸激酶和肌酸激酶2磷酸化,抑制其与LC3-Ⅱ和Atg10的相互作用,从而抑制线粒体自噬,维持线粒体稳态。当缺氧或线粒体解偶联时,Tyr18、Ser13去磷酸化,Ser17磷酸化,促进FUNDC1与LC3-Ⅱ相互作用,启动线粒体自噬。缺氧条件下,酪氨酸激酶失活,Tyr18和FUNDC1去磷酸化,FUNDC1与LC3-Ⅱ相互作用增强而促进线粒体自噬;同时,由于酪氨酸激酶能够抑制unc-51样激酶1与线粒体的结合,当酪氨酸激酶失活,unc-51样激酶1激酶可以磷酸化Ser17,促进其与LC3的作用,进而促进线粒体自噬。研究主要集中在酵母及其它重要的单细胞真核生物,而对植物和哺乳动物细胞中的自体吞噬过程的了解则更少。成都透射电镜检测自噬
酒精性脂肪肝到原发性肝病的发展过程中,细胞自噬起先是被促进的,但后来则转为抑制。在急性乙醇暴露环境下,肝细胞自噬增加,此时自噬作为一种保护机制,清理大量受损线粒体和ROS自由基,促进乙醇代谢等。乙醇被氧化分解代谢主要是通过肝脏乙醇脱氢酶和细胞色素P4502E1催化反应。但在用乙醇处理人肝病细胞的模型中,观察到细胞色素P4502E1抑制了细胞自噬,并促进了脂质堆积,其机制可能是慢性乙醇暴露环境下,长期内质网应激条件下,自噬效应减弱,溶酶体融合、降解自噬小体能力降低,因为内质网含自噬小体形成需要的膜结构和蛋白质。吉林细胞自噬通路明丹酚酸B能抑制饥饿心肌细胞自噬,从而发挥保护作用。
RFP是一种红色荧光蛋白,当其与GFP进行LC3B的共同标记时,在GFP被溶酶体酸性环境所淬灭的情况下,可以发出红色荧光的RFP因为其zhuoyue的稳定性而被保留。因此,通过融合表达RFP-GFP-LC3B蛋白,可以非常有效地追踪自噬过程。在用RFP-GFP-LC3B慢病毒感染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下RFP-GFP-LC3B以弥散的黄色荧光(RFP和GFP的综合效果)形式存在于细胞质中;而在自噬的情况下,荧光显微镜下RFP-GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以黄色斑点的形式表现出来(LC3B dot or punctae);当自噬体与溶酶体融合后,因GFP荧光的部分淬灭而以红色斑点的形式表现出来。
氯喹及其衍生物羟基氯喹zhiliao小细胞肺ai、原位导管ai、原发性肾ai、乳腺ai等目前已经进入临床I期或II期研究阶段, 但是关于抑制自噬zhiliao中流的观点受到很多质疑。首先, 没有证据判断氯喹是通过抑制溶酶体活性还是与溶酶体无关的其他作用发挥抗中流效应的。其次, 也有观点认为自噬可能是化疗过程中促进中流细胞死亡的机制。因为敲低自噬关键蛋白后阻碍了化疗药物诱导的细胞死亡。此外, 众多证据显示, 有些活化自噬的药物同样具有抗中流作用。用于预防家族性乳腺ai的他莫昔芬能够诱导自噬活化。自噬可影响细胞因子的产生、趋化作用等。
一旦瘤发生后,细胞自噬则转为促进肝病发展的作用。首先可能与自噬维持细胞内稳态、提供营养物质有关,这成为肝病发展的一大促进条件。瘤细胞代谢高,且多处于低氧低pH环境,而细胞自噬使瘤细胞在饥饿、应激反应状况下通过降解各种受损细胞器、异常蛋白质得以存活。研究表明在低氧环境下,50%~60%的瘤细胞中自噬活动明显增多。一项针对156例肝病患者的研究证实LC3-Ⅱ的自噬表达水平随着肝病病程延长而增加,且与恶性转移和低生存率呈正相关。其次自噬还可通过提高肝病细胞的化疗抗性等促进瘤发展,如自噬基因Beclin1或ATG5缺失时,索拉非尼的杀伤瘤细胞能力更强,且抗瘤增殖能力也提高。还有研究表明,乌司他丁可抑制肝病细胞SMMC-7721自噬,从而减弱表柔比星治理肝病时的化疗抵抗。噬可以被描述为细胞质内的成分被双层膜的囊泡包裹,形成自噬体,进而传递到溶酶体进行降解的过程。北京自噬通路
家族性AD患者体内ps-1基因突变导致溶酶体酸性下降, 自噬小体的成熟转化过程受阻, 导致自噬小泡大量堆积。成都透射电镜检测自噬
对抗关系中,自噬与凋亡的目标及过程背道而驰。自噬并不引发细胞死亡,相反促进细胞存活。内质网应激中,自噬通过消化蛋白聚集物和错误折叠蛋白维护内质网功能,限制了内质网应激反应诱发的细胞凋亡。在细胞能量危机的时候,自噬还通过消化细胞器和蛋白质等大分子为细胞提供能量和营养,延长细胞寿命。因而在成年小鼠的饥饿期、乳鼠出生后的喂养适应期以及营养剥夺的细胞中,均显示出自噬为细胞存活所必需。在细胞遭受代谢应激、药物调整和放射性损伤时,自噬也是维护基因完整性的重要机制。因此,在乳腺病、前列腺病及结肠病细胞中阻止自噬,能够提高病变细胞对放化疗的敏感性。线粒体自噬是自噬的一种,它能通过清理去极化线粒体减少活性氧簇,达到细胞保护的目的。线粒体自噬甚至可通过减少线粒体外膜通透化和减少细胞色素C和SMAC/DIABLO等线粒体促凋亡蛋白的释放阻止凋亡发生。大自噬,也就是通常说的自噬,是真核细胞蛋白降解的途径之一。成都透射电镜检测自噬
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