组织外泌体WB

在20世纪80年代，外泌体被描述为从网织红细胞分泌的内体来源的囊泡。人们对这些细胞外囊泡的兴趣逐渐增加，因为它们似乎参与了很多细胞过程。外泌体携带蛋白质、脂质和RNAs，介导体内不同细胞类型之间的细胞间通讯，从而影响正常和病理状态。只有近，科学家才认识到将外泌体与其他类型的细胞外囊泡分开的困难，这排除了特定功能对不同类型分泌的囊泡的明确归因。为了阐明这个复杂但正在发展的科学领域，该综述着重于外泌体和其他分泌的细胞外囊泡的定义。讨论了它们的生物发生，分泌及其后续的命运，因为它们的功能依赖于这些重要过程。外泌体与各种疾病的相关性被检测出，特别是血液中释放的病细胞来源的外泌体。组织外泌体WB

细胞分泌到细胞外环境中分别称为外泌体和微泡的细胞外膜泡是内源性和质膜起源的不同类型的膜囊泡。这些细胞外囊泡（EVs）表示了细胞间通讯的一个重要模式，作为膜和细胞溶质蛋白、脂质和RNA细胞之间传递的载体。泌体是细胞内源性的小囊泡，由大多数细胞分泌。在抗原呈递细胞中的外泌体发挥作用的报道后，人们对外泌体的兴趣增强，并且观察到它们可以在体内刺激免疫应答。在过去几年中，有几个实验室报道了各种细胞类型的外泌体分泌，并讨论了其潜在的生物学功能。然而，我们对于EV形成的分子机制知识的缺乏以及缺乏干扰货物包装或囊泡释放的方法仍然妨碍了其在体内生理相关性的探索。这篇综述专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制。组织外泌体WB随着外泌体研究的不断深入，它的应用已经涉及医学基础和免疫领域、寄生虫领域。

l 亲脂染料标记外泌体：目前已发表的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料进行标记，体内和体外都有较多应用。亲脂性染料主要分为两大类，一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较普遍。第二类是Di系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光）。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，在活成像中用来示踪。

当外泌体在1980年初次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、种瘤侵袭等方方面面。有研究表明种瘤来源的外泌体参与到种瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了种瘤的生长与侵袭。外泌体可由间充质干细胞、淋巴细胞和肿细胞细胞等多种类型细胞主动分泌释放。

外泌体免疫磁珠法，这种方法可以保证外泌体形态 的完整，特异性高、操作简单、不需要昂贵的仪器设备，但是非中性pH 和非 生理性盐浓度会影响外泌体生物活性， 不便进行下一步的实验 。PS亲和法，该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。该方法与免疫磁珠法相似，获得的外泌体形态完整，纯度高。由于不使用变性剂，不影响外泌体的生物活性，外泌体可用于细胞共培养和体内注射。2016.9 《Scientific Reports》 杂志发表了该方法新数据，表明PS法可提取相当高纯度的外泌体。色谱法，这种方法分离到的外泌体在 电镜下大小均 一， 但是需要特殊的设备 ， 应用不普遍 。外泌体观察到它们可以在体内刺激免疫应答。组织外泌体WB

NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。组织外泌体WB

所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。 有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。一类外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一种。它可以调节外泌体膜与受体细胞的融合，有文献报道称RAB4, RAB5和 RAB11主要出现在早期以及回收的核内体中，RAB7 和 RAB9主要出现在晚期的核内体。现有大量的研究发现外泌体中含有40种RAB蛋白。组织外泌体WB