成都外泌体lncRNA测序

为什么超速离心提取外泌体看不到沉淀？答：这种问题通常有三种可能性，其一：使用的细胞上清或者血清量太低，从而造成了这样的结果。其二：使用了不透明的超速离心管，一般来说外泌体产量都比较小，所以凡是不透明的管子，基本都是比较难见到明显沉淀的，可以当做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角转。部分品牌离心机的角转管壁粘附性比较低，超离结束没多久沉淀就会滑落下去，所以请在离心结束时赶紧去收样。外泌体的角色：1、外泌体发挥功能并一定需要受体细胞摄入外泌体：外泌体的膜蛋白有可能与细胞膜蛋白作用，活跃细胞内通路。2、外泌体的角色之一：细胞-细胞通讯，比如抗原递呈。外泌体作为蛋白质的药物递送载体。成都外泌体lncRNA测序

外泌体提取在短时间（一周之内）使用，可以放在4度保存，如果长时间保存可以放在-20度或-80度保存。也可以将外泌体进行分装，分别放在-20度或-80度。外泌体检测方法：外泌体分离之后，需要经过一系列鉴定才能确定分离的是外泌体。鉴定方法从物理特征到表面分子标志物，多角度进行鉴定。l、透射电镜鉴定法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构观察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形。2、纳米颗粒追踪分析法：简称NTA，该方法能保证外泌体原始状态、检测速度快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息。外泌体测定在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制。

细胞外小泡通过充当脂肪组织、肝脏、骨骼肌和免疫细胞之间的细胞间通讯方式，在肥胖及其代谢并发症的发展中发挥作用。外泌体可能在外周胰岛素敏感性的调节中起作用，外周胰岛素敏感性是T2D发病机理的主要组成部分。外泌体似乎通过至少两种不同的机制来调节胰岛素敏感性，即通过调节炎症或通过与胰岛素反应性部位的直接相互作用。后者可通过与主要胰岛素信号分子（例如磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt信号通路）相互作用而影响胰岛素信号通路而直接或间接发生。与对照组相比，糖尿病患者的血浆EV含量更高，并且与对照组相比，糖尿病小鼠的血浆外泌体数量也更高。然而，确定外泌体的作用及其在肝/肠轴通讯中的潜在作用将需要对它们的组成有更好的了解，特别是饮食是否会改变肠源性外泌体的含量，因此就胰岛素反应而言它们的生物学功能尚未研究。

当外泌体在1980年初次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肉瘤侵袭等方方面面。有研究表明肉瘤来源的外泌体参与到肉瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肉瘤的生长与侵袭。NTA技术已被作为外泌体表征手段之一。

AFC自动收集器是将qEV分离法这一过程自动化的仪器，将用来收集外泌体样本的微量离心管放置在AFC的中间转盘内，根据称重精确测量流体体积，可精确的测量到样品中每一个液滴的重量并精确测量总重量。将在空隙体积之前从qEV柱洗脱的流体收集到AFC转盘的单独中心孔中并送至废液桶，避免将不需要的空隙部分收集到微量离心管中。在提取期间，当达到设定的提取体积后，转盘会自动旋转到下一个微量离心管继续收集，到收集完成后自动停止。微滴式数字PCR技术不佳有效提高了核酸分子的扩增效率，而且由于采用微滴计数的方法进行定量，可以不依赖与RT-PCR的荧光信号和Ct值，对所测样品中的核酸分子进行一定定量。外泌体实际应用之前，需要使用大型动物模型进行进一步研究和临床试验。外泌体产生及去向

外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进瘤子发生和转移等作用。成都外泌体lncRNA测序

外泌体研究背景：胞外囊泡是从细胞膜上脱落或者由细胞分泌的具有双层膜结构的囊泡状小体，主要由微囊泡、凋亡小体、外泌体组成。而外泌体是其中一类小囊泡，直径为30~150nm，密度1.10~1.18g/ml，可携带核酸、蛋白质质和脂质等，存在于血液、唾液、尿液等多种体液中。越来越多的研究证实，外泌体可以通过细胞间转移核酸、蛋白质、脂质等特定物质，发挥特殊的功能。如在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、肿细胞细胞发生了发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。对外泌体的分析和检测可以辅助疾病的早期诊断、疗效评价和预后分析。成都外泌体lncRNA测序

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