福州冷冻透射电子显微镜技术平台

时间:2023年05月12日 来源:

冷冻电镜技术原理之单颗粒技术:对分散分布的生物大分子分别成像,基于分子结构同一性的假设,对多个图像进行统计分析,并通过对正、加和平均等图像操作手段提高信噪比,进一步确认二维图像之间的空间投影关系后经过三维重构获得生物大分子的三维结构方法。其适合的样品分子量范围为80~50MD,Zgao分辨率约0.3nm。利用单颗粒技术获得三维重构的方法主要包括等价线方法、随机圆锥重构法、随机初始模型迭代收敛重构等方法,其基本目标是获得二维图像之间正确的空间投影关系,从而进行三维重构。冷冻电镜技术之冷冻蚀刻电子显微镜优点:样品通过冷冻,可使其微细结构接近于活的状态。福州冷冻透射电子显微镜技术平台

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冷冻电镜技术中的单颗粒分析法(Singleparticleanalysis,SPA):单颗粒技术获得投影的具体方法:制备很多具有同样结构的大分子样品,将其进行分散冷冻后进行随机的投影拍照,再通过计算模拟测定角度,对具有相同角度的粒子进行组合,突出其中更特殊、更容易解释的特征。单颗粒冷冻电镜是针对单个粒子进行重构的技术,但我们的研究对象往往是多构象或结构异质的蛋白,颗粒之间存在细微差别,这是一些蛋白质无法获得高分辨结构的重要原因之一。对于结构异质性样品的分析,我们需要首先将样品分成几个同质的子集,然后分别进行三维重建。由于单颗粒分析法理论成像分辨率更高,尤其在分析具有同质性结构的样品时表现出更方便、更优异的成像能力,因此得到了更普遍的应用。单颗粒分析法的研究对象可以是具有某种对称性的颗粒,也可是不具有任何对称性的蛋白分子或复合体,尤其是针对核糖体的表征。连云港低温透射电镜技术用途冷冻电子显微镜技术之样品成像:低剂量辐照成像,普通样品材料在进行表征时,电子剂量越高成像质量越好。

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冷冻电镜技术原理之电子晶体学:利用电子显微镜对生物大分子在一维、二维以致三维空间形成的高度有序重复排列的结构(晶体)成像或者收集衍射图样,进而解析这些生物大分子的结构,这种方法称为电子晶体学。其适合的样品分子量范围为10~500kD,Zgao分辨率约0.19nm。该方法与X射线晶体学的类似之处在于均需获得高度均一的生物大分子的周期性排列,不同之处是利用电子显微镜除了可以获得晶体的电子衍射外还可以通过获得晶体的图像来进行结构解析。

冷冻电镜技术近年来获得了迅猛的发展,取得了许多具有重大意义的成果。冷冻电镜将生物分子进行冷冻便可进行高分辨率成像,还具有分辨率高、更接近天然状态、适用研究对象普遍等优势。同时,系统地综述了冷冻电镜技术在科学研究中的应用,并展望冷冻电镜技术未来的发展。冷冻电镜(cryo-electronmicroscopy,cryo-EM)技術,是在低温下使用透射电子显微镜观察样品的显微技术,即把样品冷冻并保持低温放进显微镜里面,用高度相干的电子作为光源从上面照射,透过样品和附近的冰层,受到散射,再利用探测器和透镜系统把散射信号成像记录下来,较后进行信号处理,得到样品的结构。冷冻电镜技术,是一种重要的结构生物学研究方法。

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单颗粒冷冻电镜技术的颗粒挑选:接下来需要从原始数据中筛选出颗粒投影,也被称为“颗粒挑选”,颗粒挑选的好坏也将影响所有后续的分析和处理过程,是一个重要并且繁琐的步骤。颗粒挑选方式可以分为手动挑选、半自动挑选和完全自动挑选这几种。在早期的分析中,对于结构的了解还非常少,优先考虑的都是人工挑选。但是自动的颗粒图像获取方法的出现使得在很短时间内可以收集数十万张颗粒图像,人工挑选大量的颗粒图像不太现实,并且人工的挑选通常会过于集中于某一类颗粒图像,导致遗漏和偏差。半自动和全自动的方法主要有以下三类:(1)通过例如降噪、反衬增强、边缘算子等图像形态学方法搜索区域,基于数字图像处理学的原理,将颗粒图像与背景分离开来。(2)基于模板的方法,通过扫描数据图像和已知的模板比较来挑选出潜在的颗粒图像,模板的来源通常为手动选出的数据图像中较为清晰的颗粒图像,或者是已知结构的投影。(3)结合无模板和有模板的方法,通过一些有监督的机器学习算法进行颗粒挑选。冷冻电镜技术的基本原理是将生物大分子溶液置于电镜载网上形成一层非常薄的水膜。温州透射电子显微镜技术哪家好

冷冻电镜技术之冷冻透射电镜优点:透镜多,光学性能好。福州冷冻透射电子显微镜技术平台

冷冻电镜技术揭示生物分子细节:在透射电子显微镜下,高能电子束穿透每一个分子,如同X光穿过人的身体一样,可以拍摄到分子的形貌和它内部的结构信息。科学家们利用计算机将样本里的每一个分子提取出来,把相似的分子予以归类,然后叠加、平均获得其内部结构更为精细的图像,由此得到分子不同方向的二维结构,较后经过计算机三维重构算法,可以得到分子的三维模型。这一过程被称为冷冻电镜三维重构解析。冷冻电镜技术的发展,使得现在的人类可以对细胞内的生命活动有更多了解。未来,科学家将借助冷冻电镜技术继续对复杂生命体的解读。福州冷冻透射电子显微镜技术平台

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