MSCs培养血小板裂解液
间充质间质细胞(MSCs)体外扩增的培养基一般添加胎牛血清FBS,但是考虑到异种传染及免疫反应的风险,监管机构并不鼓励使用。人血小板裂解液除了不存在异种免疫反应或牛病原体传染的风险,有助于增强间充质干细胞的扩增,也相对容易地根据良好的生产规范程序生产,并已用于临床应用,因此现如很多资料显示血小板裂解液已被证明是扩增MSCs一种非常有效的FBS替代方法(参考文献1)。 血小板裂解液由血浆组成,含有纤维蛋白原和凝血因子,对于一般细胞培养中涉及的含钙培养基来说通常需要加入抗凝剂(常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等)来防止凝胶形成,其中肝素较为常用。
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美国Sexton公司致力于为细胞和基因zhiliao行业提供解决方案,以改善客户实验结果和降低风险。两款人源血小板裂解液Stemulate和nLivenPR(通过病原体减少PR技术处理以进一步降低风险)为用户提供了一种可用于生产多种细胞类型的伟大方案。如果需要大批量生产使用,我们的专有工艺确保每个批次都提供安全一致的产品。也许由于血小板中蛋白表达的性质与血液生物化学固有的可变性质,对多个批次的Stemulate和Nliven评估表明,关键因子的蛋白浓度高度一致(如图3所示的Stemulate中的EGF水平)。上海曼博生物作为美国Sexton品牌hPL产品在中国的一级代理商,为细胞zhi liao企业提供国内细胞zhi liao企业需要的长期现货的hPL,为临床以及大规模商业化生产保驾护航。欢迎咨询!无需添加肝素血小板裂解液的主要成分从哪里采集血小板裂解液的血源?
将脂肪来源的间充质干细胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS进行传代培养11代。在DME/F-12中分别添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并与10%胎牛血清进行比较。羊膜来源间充质干细胞也在2.5或5%Stemulate中培养,与10%胎牛血清相比。牙髓来源的骨髓间充质干细胞在DME/F-12中添加不同浓度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并与添加10%FBS的培养基进行比较。在所有实验中,每天都监测细胞,每次传代结束时,收获细胞,并使用台盼蓝和一个自动细胞计数器计数然后继续传代。美国Sexton的血小板裂解液的血小板来源于美国FDA注册、AABB认证的美国血库。单位必须在过期前接受异体输血。血小板捐献者接受捐赠前进行彻底筛查和检测,以降低输血传播ganran的风险,根据21CFR610和AABB血库和输血服务标准。这个筛查首先是对捐赠者的总体健康状况进行评估,包括对捐赠者的身体状况进行评估体温和高危行为指标(如肠外用药证据)。
细胞培养基制备1.比较好在4°C下解冻ELAREMPrime血小板裂解液过夜或在37°C水浴中解冻1小时。2.通过将10%ELAREMPrime血小板裂解液添加到基础培养基(即MEMα、GlutaMAX补充剂、无核苷)和1%的青霉素/链霉素作为**终浓度来制备完整的细胞培养基。3.应在完全细胞培养基中加入肝素以抗凝。我们建议添加肝素的**终浓度为2IU/mLPLSUPPLEMENT(货号PL-SUP-500)or0.024mg/mLPLSUPPLEMENT-XF(货号PL-SUP-500-XF).4.完整细胞培养基可在4°C下储存,并稳定约4周储存和稳定性ELAREMPrime在标签上注明的失效日期之前是稳定的。ELAREMPrime在使用前在-20°C(或在-80°C进行长期储存)冷冻储存时稳定。解冻后,建议将未使用的ELAREMPrime样品分装并在-20°C下重新冷冻。应避免ELAREMPrime的重复冻融循环,因为这会导不溶性颗粒形成的增加。使用时,只需预热一份完整的细胞培养基,并将剩余的培养基冷藏在4-8°C。更多关于Sexton人血小板裂解液的相关产品问题,欢迎咨询上海曼博生物!GMP等级的血小板裂解液是不含动物源成分的。
与传统的伽玛辐射方式不同,美国Sexton公司生产了一种pathogen-reduced病原体减少的hPL(PRhPL),采用电子束照射(E-beam)的过程来降低病毒传播的风险。如图1所示E-beam主要通过电离辐射的原理,通过电子束直接作用,以及电子束激发水分子产生羟基自由基、还原性水合电子等活性粒子的氧化-还原的间接作用,对包括病毒等微生物体内的DNA或RNA分子以及蛋白质包膜产生破坏,进而达到病毒减少工艺的作用效果。美国SextonPR系列产品是依照国际人用药品注册技术协调会ICH/295/95和世卫组织WHO相关附件被用作设计病毒qing chu验证的指南,建立待验证工艺的缩小模型,将工厂生产的nLivenPR,运送到测试实验室,在待验证样品中人为地加入一定种类和数量的病毒(针对血浆来源常规的代表性模型病毒)。然后产品进行病毒去除/灭活工艺步骤,处理,并返回到测试实验室进行病毒减少验证分析。更多关于Sexton相关产品,欢迎咨询上海曼博生物!血小板裂解液的使用方法是怎样的?品相佳血小板裂解液沉淀
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本研究中使用的HPL是Stemulate公司两款人源血小板裂解液(NH和H)是在工业规模(很小批量为20L)生产的,具备高度的批间一致性。将脂肪来源的间充质干细胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS进行传代培养11代。在DME/F-12中分别添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并与10%胎牛血清进行比较。羊膜来源间充质干细胞也在2.5或5%Stemulate中培养,与10%胎牛血清相比。牙髓来源的骨髓间充质干细胞在DME/F-12中添加不同浓度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并与添加10%FBS的培养基进行比较。在所有实验中,每天都监测细胞,每次传代结束时,收获细胞,并使用台盼蓝和一个自动细胞计数器计数然后继续传代。更多关于血小板裂解液的相关信息,欢迎咨询上海曼博生物!MSCs培养血小板裂解液
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