高质量糖尿病细胞模型操作指南

HCD利用人胎儿胰腺组织中的靶向Zhong Liu发生开发了永生化人β细胞系，其中使用慢病毒载体整合了两个转基因，SV40大T抗原(SV40-LT)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)两种转基因均在β细胞特异性大鼠胰岛素启动子(RIP)的控制下表达。***代细胞，名为EndoC-βH1，以组成型方式表达SV40LT和hTERT，而在第二代EndoC-βH2和EndoC-βH3中，这些转基因可在loxP介导的CRE重组后被切除，位点位于慢病毒骨架的3'LTR。EndoC-βH5细胞是通过使用表达可切除的SV40LT和hTERT的慢病毒载体对人胎儿胰腺进行靶向Zhong Liu发生而获得的。糖尿病细胞模型EndoC-BH5 细胞作为模型来研究 1 型糖尿病相关的促炎细胞因子敏感性和 b 细胞衰老机制.高质量糖尿病细胞模型操作指南

Humancelldesign开发了创新且安全的人类β细胞系生产方法。首先，将每个转导的人类胎儿胰腺芽移植到2或3只SCID小鼠的肾被膜下，因为该部位是人类胰腺发育的允许部位。在6到8个月内，所有移植的小鼠都发生了原发性胰岛素瘤，这导致它们的血糖水平下降。与其他胰腺移植相比，原发性胰岛素瘤是高度血管化的。然后将原发性胰岛素瘤中这些高度血管化的区域分离，用在大鼠胰岛素启动子控制下表达hTERT的慢病毒进行转导，并移植到其他SCID小鼠中。这些小鼠在2至3个月内出现低血糖，胰岛素阳性细胞大量扩增。这种体内扩增有助于维持大量增殖的胰岛素细胞，并允许定义允许的培养条件，在这种条件下，可以在体外建立永生化细胞系。北京EndoC-BH2糖尿病细胞模型糖尿病细胞模型安全创新，已经进行了流氏分析和免疫荧光分析、RNA-seq等功能验证。

然后将转导的芽移植到SCID小鼠体内，使其发育成成熟的胰腺组织。分化后，新形成的表达sv40lt的β细胞增殖并形成胰岛素瘤。然后用人端粒酶逆转录酶(hTERT)转导β细胞，移植到其他SCID小鼠体内，在体外扩增生成细胞系。其中一种细胞系，EndoC-βH1，表达了许多β细胞特异性标记，而没有任何其他胰腺细胞类型标记的实质性表达。在葡萄糖或其他胰岛素分泌剂的刺激下，细胞分泌胰岛素，细胞移植逆转了化学诱导的小鼠糖尿病。Human cell design 构建了EndoC-BH1,En-doC-BH3, EndoC-βH5, GLTx EndoC-βH5 , HLA-A2 EndoC-βH5等一系列的胰岛B细胞模型。

EndoC-βH1使用慢病毒介导的基因转移从人类胎儿胰腺中产生功能性β细胞，这些胰腺处于发育的早期阶段，即9至11周，这段时间与β细胞分化的开始相吻合(33)。整合的转基因SV40LT受大鼠胰岛素启动子控制，在胰岛素阳性细胞中特异性表达。通过使用这种靶向方法，SV40LT在新形成的β细胞中表达，同时这些细胞头次产生胰岛素。因此，我们成功地模仿了用于产生功能性啮齿动物β细胞系的转基因方法(7,8,34)，用于从人胎儿胰腺中开发功能性人β细胞系。流式细胞术分析表明所有糖尿病细胞模型 EndoC-BH5 细胞均呈胰岛素阳性。

Human Cell Design 开发了创新且安全的人类β细胞系生产方法。首先，将每个转导的人类胎儿胰腺芽移植到 2 或 3 只 SCID 小鼠的肾被膜下，因为该部位是人类胰腺发育的允许部位。在 6 到 8 个月内，所有移植的小鼠都发生了原发性胰岛素瘤，这导致它们的血糖水平下降。与其他胰腺移植相比，原发性胰岛素瘤是高度血管化的。然后将原发性胰岛素瘤中这些高度血管化的区域分离，用在大鼠胰岛素启动子控制下表达 hTERT 的慢病毒进行转导，并移植到其他 SCID 小鼠中。这些小鼠在 2 至 3 个月内出现低血糖，胰岛素阳性细胞大量扩增。这种体内扩增有助于维持大量增殖的胰岛素细胞，并允许定义允许的培养条件，在这种条件下，可以在体外建立永生化细胞系。Human Cell Design（HCD）开发了一种用于在人类胎儿组织中使用靶向Zhong Liu产生功能的人类β细胞系。在胰岛素启动子的控制下，用表达 SV40LT 的慢病毒载体转导人类胎儿胰腺芽。糖尿病细胞模型EndoC-BH5 细胞表现出动态胰岛素分泌以及对肠促胰岛素的强烈且剂量依赖性反应。人源细胞模型开发糖尿病细胞模型批量化生产且纯度高

human cell design的糖尿病细胞模型好不好用？高质量糖尿病细胞模型操作指南

在EndoC-βH5细胞中检测到所有对β细胞身份和功能重要的转录因子的表达。与成人b细胞相比，EndoC-βH5细胞中的表达水平相似（FOXA2、MNX1、NKX2.2）或更高（HOPX、MAFB、NEUROD1、PAX6、PDX1）。GLIS3、NKX6.1和MAFA在EndoC-βH5细胞中以较低水平表达EndoC-βH5细胞中表达与胰岛素分泌相关的受体，包括肾上腺素(ADRA2A)、脂肪酸(FFAR1、FFAR3)、GABA(GABRB3)、胰hao xue tang素(GCGR)、生长抑素(SSTR2)和肠jiang xue tang素受体，例如胰gao xue tang素样受体肽-1(GLP1R)和胃抑制多肽(GIPR)。重要的是，EndoC-βH5细胞中的GLP1R、GIPR和GCGR比EndoC-bH1细胞中更丰富。高质量糖尿病细胞模型操作指南