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上海东寰生物科技有限公司即核苷渗入法。以前常用的核苷渗入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸类似物)法,但BrdU法的缺点是需要变性DNA后才能与抗体结合,导致了DNA双链结构的破坏,影响了其他染料的结合染色,导致染色弥散,准确性降低等问题。EdU法作为新型的核苷渗入法具有以下优点:安全—–不使用[3H]thymidine,无放射性污染。简单—–基于小分子化学反应的检测方法,简单高效,需三步:EdU孵育;细胞固定;荧光检测。无需DNA变性和孵育抗体。EdU细胞增殖检测试剂盒价格。北京咨询EdU细胞增殖检测试剂盒厂家
EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。AdrianSalic特别强调:“与传统的免疫荧光染色不同,EdU反应能在几分钟内完成,且不需要进行严格的样品变性处理,使得组织成像更简单易行。”细胞增殖检测方法基于EdU与Apollo?荧光染料的完美结合准确检测新合成的DNA,简单,快速,准确。这种检测方法非常快速,且只需简单的几个步骤,因此也适用于高通量筛选试验,如在药物筛选中检测加药后细胞的活力。江西哪一家EdU细胞增殖检测试剂盒原理EdU细胞增殖检测试剂盒去哪买?
荧光试剂请避光保存。反应缓冲液10X1ml催化剂溶液25x400ulTAMRA红色荧光溶液400x25ul缓冲添加剂粉末200mgHoechstX20ul使用前须知该产品是采用成像检测方法对贴壁细胞进行检测,适用于荧光显微镜、共聚焦显微镜等仪器。非贴壁细胞可在孵育EdU后进行细胞涂片处理,固定后再采用贴壁细胞的染色流程进行检测。也可以应用于流式细胞仪检测。实验步骤(以24孔板,HK2贴壁细胞为例)EdU标记(a)将细胞完全培养基中按照500:1的比例加入EdU溶液,制成2xEdU标记培养基;(b)提前将2xEdU标记培养基预热,然后等体积加入到细胞原有培养基中,获得lxEdU溶液,其中EdU的终浓度为10uM;注:1)我们不建议替换全部培养基,因为这样可能会影响细胞增殖的速度;2)配置好的培养基建议现用现配,用量以没过细胞为宜;(c)每孔加入300ul含EdU培养基孵育细胞2小时,弃培养基;注:1)培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态;2)大多数**细胞以及粘附细胞系均可采用2小时的孵育时间(d)以lxPBS清洗细胞两次,毎次5分钟,以除去未掺入DNA的EdU残留。注:贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。细胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛细胞固定液,室温培养30分钟,弃固定液;(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸。
EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物,分子量很小,在动物体内能够迅速扩散到各种组织和中,并渗入正在复制的DNA分子,通过基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可简单、快速、准确地检测出细胞增殖情况。与BrdU检测方法相比,EdU检测方法用量小得多,十分之一的用量即可获得与BrdU检测试剂盒相同甚至更好的检测结果,而且小分子化学反应检测方法反应快,效率高,反应时间需几分钟,不需要DNA变性、蛋白酶处理、抗原抗体过夜孵育,能够更好地保护细胞形态,更简单、更灵敏、更快速、更准确。上海东寰告诉您EdU细胞增殖检测试剂盒的应用范围。
蛋白抽提/WesternBlotting技术服务WesternBlotting技术服务(DH1004)一.服务内容1、蛋白提取:从人或动物细胞、组织,细胞等样品中提取蛋白样品。2、蛋白定量:对样品中蛋白进行半定量分析。3、WesternBlot检测(1)电泳:聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分离蛋白样品。(2)湿法转印。(3)杂交:用抗体鉴定膜上的特定蛋白。(4)显色:ECL荧光显色,黑条带白背景照片4、提供蛋白内参检测(所有内参抗体均不收取费用)。5、预实验及正式实验服务。二.样品要求1、细胞>1×10^7;组织>30mg;细菌湿重>1mg等。2、样品蛋白浓度>1mg/ml,蛋白量>200ug/样品。3、建议提供目的蛋白阳性表达样品(纯蛋白、有阳性表达的细胞或组织、商品化的阳性对照产品等)作为阳性对照。注:若有特殊处理的样品,请尽可能出示相关材料(具有保密性的材料除外)。三.收费标准服务项目免疫学检测服务内容周期产物/报告价格(元)DH1004-01样品准备总蛋白提取、定量、质控3天总蛋白质控报告100元/样DH1004-02免疫印迹(WB)WB预实验,质控WB体系5-10天完整实验报告1000元/膜WB检测正式实验10-15天完整实验报告1000元/膜四、客户提供材料1、样品:新鲜或正确保存的样品以及与样品相关的必要资料。EdU细胞增殖检测试剂盒在社会上的重要性。湖南咨询EdU细胞增殖检测试剂盒价格
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试剂盒以外自备试剂和仪器:●PBS●纯水●1%乙酸●移液器及吸头●有515nm波长的酶标仪使用方法:使用注意事项:●接种时注意细胞悬液一定要混匀,以避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发,为了减少误差,建议培养板的四边每孔只加培养基,而不作为指标检测孔。●培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。●用水或乙酸洗细胞时充满孔后保持一会倒掉即可,也可以用排或洗板机。●OD值在1-2之间较好。以96孔板为例:1.取出培养好待测的96孔板。2.在培养基表面小心加入50μl固定液(悬浮细胞加100μl固定液),静置5分钟后放入4℃冰箱30分钟-1小时。(贴壁细胞可弃培养基后加入用水3倍稀释的固定液;悬浮细胞必须直接加入固定液,轻加在培养液面,静置5分钟后再将平板移至4℃放置1小时,可使悬浮细胞固定在培养孔底部)。 北京咨询EdU细胞增殖检测试剂盒厂家
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