山东提供EdU细胞增殖检测试剂盒说明书

细胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK8等方法。其中EdU检测方法是新的细胞增殖检测方法。细胞增殖是生物体的重要生命特征，细胞以分裂的方式进行增殖。单细胞生物，以细胞分裂的方式产生新的个体。真核生物的分裂依据过程不同有三种方式，有有丝分裂，无丝分裂，减数分裂。其中有丝分裂是人、动物、植物、等一切真核生物中的一种普遍的分裂方式，是真核细胞增殖的主要方式。减数分裂是生殖细胞形成时的一种特殊的有丝分裂EdU细胞增殖检测试剂盒的基本结构级应用。山东提供EdU细胞增殖检测试剂盒说明书

EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替T渗入正在复制的DNA分子，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性，通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。与BrdU检测方法相比，EdU检测方法更快速、更灵敏、更准确。EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500，在细胞内很容易扩散，无需DNA变性（酸解、热解、酶解等）即可有效检测，可有效避免样品损伤，在细胞和组织水平能更准确地反映细胞增殖等现象江苏正规EdU细胞增殖检测试剂盒说明书EdU细胞增殖检测试剂盒怎样使用？上海东寰告诉您。

    4%多聚甲醛固定液或冷**固定液(-20℃预冷20min)。d,封闭液。e,／LPBS缓冲液。2、染色方法a,取出培养有细胞的盖玻片，用洗2-3遍。b,加入4%多聚甲醛试问固定30minc.加入的Tritonx-100,37℃,5min，PBS洗两次，5min/次d.加入含、1%BSA的PBS中室温封闭30min-1h。e.去封闭液，直接加入一抗，37℃孵育1h或4℃过夜。抗体以mo/LPBS稀释(理想的抗体浓度需经试验而定)。，10min/次g.加入FITC-二抗或TRITC-二抗，37℃，孵育1h。，10min/次，用滤纸吸干。(PBS配制)封片。j.免疫荧光显微镜下观察，或于4℃避光保存。免疫荧光双标记方法免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子，当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些，应注意所用的一抗是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如：A抗体为多克隆抗体，来自家兔；B抗体为单克隆抗体，来自小鼠)。其次，两种二抗所带荧光素的发射光不应重叠，且尽量远离，通常可以选择FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5，或Cy3和Cy5等来组合。通常情况下，染色时两种一抗可以同时孵育，然后可以同时孵育两种二抗。但当染色结果一种颜色非常弱，而另一种颜色比较强时，应考虑先孵育颜色较弱的二抗。

BrdU法和BeyoClick™EdU法检测原理的比较。A.BrdU法需使用大分子的BrdU抗体，由于空间位阻，双链DNA须变性后才能使BrdU抗体与BrdU结合。法使用小分子标记的叠氮化物(Azide)，无需DNA变性，操作更便捷，兼容性好，检测结果更加稳定可靠。本试剂盒检测快速。相对于BrdU法，本试剂盒采用BeyoClick™EdU法检测新合成的DNA，所需时间缩短。经本试剂盒处理后，增殖的细胞呈棕色，可以用普通光学显微镜进行观察。HeLa细胞用本试剂盒检测细胞增殖的效果参见图3。图3.HeLa细胞用本试剂盒检测细胞增殖的效果图。无EdU组观察不到棕色染色(左侧一列)；EdU(10μM)孵育2小时组有明显的棕色染色(中间一列)；而用10mM的DNA合成抑制剂羟基脲(Hydroxyurea)提前预处理0.5小时后，棕色染色减弱，说明DNA合成被抑制后，EdU的掺入被抑制(右侧一列)。上海东寰与您分享EdU细胞增殖检测试剂盒对如今市场的影响。

EdU细胞增殖检测试剂盒BeyoClick™EdU细胞增殖检测试剂盒(DAB法)(BeyoClick™EdUCellProliferationKitwithDAB)，是一种基于DNA合成过程中胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidine)类似物EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)的掺入，并通过随后的点击反应(Clickreaction)使EdU被生物素(Biotin)所标记，然后加入的辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(HRP-Streptavidin)与生物素结合，再然后通过DAB显色，从而实现简单、快速、高灵敏地检测细胞增殖的试剂盒。EdU细胞增殖检测试剂盒的重要组成部分。上海品质好的EdU细胞增殖检测试剂盒供应商

EdU细胞增殖检测试剂盒的发展趋势如何？山东提供EdU细胞增殖检测试剂盒说明书

    注：1）培养时间取决于细胞的增殖速度和生长状态；2）孵育时间至少2小时，可延长至24小时后再检测也可以。4、以1×PBS清洗细胞两次，每次5分钟，以除去未掺入RNA的EU残留。注：贴壁不牢的细胞可降低清洗强度。细胞的固定和通透1、每孔加入150μl细胞固定液，室温培养30分钟，弃固定液；注：1)该试剂盒配备了细胞固定液，也可以使用含4%多聚甲醛的PBS来进行细胞固定；2)如果使用其他的细胞固定剂建议用DEPC水来配置，避免RNA酶降解细胞内的RNA。2、每孔加入150μl2mg/ml甘氨酸，摇床孵育5分钟；3、弃甘氨酸溶液，每孔加入300μlPBS洗液，室温清洗5分钟；4、每孔加入300μlTritonX-100细胞通透液，室温通透10分钟，弃细胞通透溶液；5、每孔加入300μlPBS洗液，室温清洗5分钟；EU染色1、通过用10：1去离子水稀释10×反应缓冲液进行配制1×EU反应缓冲液；2、按照溶解200mg缓冲添加剂溶于1ml去离子水的比例称取适量的粉末进行溶解，即为可用的缓冲添加剂的浓度，建议现用现配；注：缓冲添加剂为白色粉末，较难准确称量，称量范围可稍微放宽，但是不应超过±20%，且该粉末较易氧化，使用后请旋紧管盖，如试剂出现棕黄色，则需报废或更换。山东提供EdU细胞增殖检测试剂盒说明书