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一、为什么缓冲溶液可以维持PH值的稳定呢?其实这主要是因为缓冲溶液自身的成分和性能,它的成分里包含了酸、盐或碱,所以在一定程度上可以抵消外界加入酸性或碱性溶液带来的影响。二、配制缓冲溶液作用有哪些?1、缓冲溶液是分析检测实验中常会用到的溶液,实验中通常会要求溶液的pH值需要保持在一个规定的范围内,以保证指示剂的显色或变色,这些通过加入一定量的缓冲溶液就能达到目的。2、缓冲溶液在医学检验中也起着很重要的作用,主要是因为缓冲溶液可以保持机体正常血液PH范围,其中碳酸-碳酸氢钠是血液中主要的缓冲对,这与肺呼吸以及肾功能排泄息息相关。而机体正常新陈代谢后产生的CO2,会进入血液与水结合成碳酸,碳酸又与血浆中的碳酸氢根离子组成共轭酸碱对,所以缓冲溶液在医学上就有不可忽视的作用。什么是缓冲溶液?请简述其在生物体中的作用。浙江有酚红缓冲液价格查询
1:50~l:800)后,按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值;为0.8左右,阴性参考血清A值<0.1的包被抗原稀释度为工作浓度。?方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg/L、lmg/L、/L三个浓度按行包被,每一个浓度包被三行(每行3孔),分别在每个浓度包被的***、二、三行中分别加入强阳性抗原,弱阳性抗原和阴性对照,将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l000、l:5000、l:10000三个浓度,分别加入每个浓度包被的***、二、三列中。加底物显色,加酸终止反应,分别读取A值。以强阳性抗原液A值在,阴性参考A值<**适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的**佳工作浓度。?二、ELISA**适工作浓度的选择及标准化操作1**适工作浓度的选择?1.1间接法测抗体?????酶标抗体工作浓度的选择:①用IgG进行包被,洗涤。②将酶标IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中,保温、洗涤。③加酸终止反应后,读取吸光度(A)。读取A值在1.0时的酶标抗体稀释度,作为酶标抗体的工作浓度。河北有酚红缓冲液哪家好生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris(三羟甲基氨基甲烷)等系统。
缓冲液的作用和使用注意事项
一、缓冲液的概念缓冲液(Buffersolution)通常是由弱酸及其共轭碱或弱碱及其共轭酸缓冲对所组成的溶液,能够在加入一定量其他物质时减缓pH的改变。以生物实验中**常用的一种缓冲液PBS为例,是由Na2HPO4、KH2PO4组成的缓冲对,在PH5.8-8.0范围内有较强的缓冲能力。二、缓冲液的作用缓冲溶液的作用是在有限的范围内调整溶液的pH值,使待测溶液的酸度符合分析方法所规定的范围。例如,苯酚在碱性介质及铁**钾存在下,可与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料,为了防止芳香胺类的干扰以pH在10士0.2时**为适宜。为此,就需要在待测溶液中加入氨一氯化钱缓冲溶液调整和控制待测溶液的pH为10.0士0.2。
3.高温高压**后,4℃保存。SolutionI(质粒提取用)组份浓度:25mMTris-HCl(),10mMEDTA,50mMGlucose配制量:1L配制方法:1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。2.高温高压**后,4℃保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。SolutionII(质粒提取用)组份浓度:200mMNaOH,1%(W/V)SDS配制量:500ml配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加**水定容至500ml,充分混匀3.室温保存,此溶液保存时间比较好不要超过一个月注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌SolutionIII(质粒提取用)组份浓度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml配制方法:1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中。2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压**后,4℃保存。MEDTA()组份浓度:MEDTA配制量:1L配制方法:1.称取gNa2EDTA·2H2O,置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至(约20gNaOH)。注意:pH值至,EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后,高温高压**。6.室温保存。1MDTT组份浓度:1MDTT配制量:20ml配制方法:1.称取gDTT,加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的MNaOAc()。一种溶液是否是缓冲溶液,可以通过在溶液中加入少量的酸或碱,观察pH值的变化来判断。
pbs缓冲液的配制配方是10X的PBS母液,然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。PBS是磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferSaline),是生物学实验室**常用的缓冲液之一。其主要成分包括:氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、磷酸氢二钠(Na2HPO4)和磷酸二氢钾(KH2PO4)。配制步骤:清洗干净所需烧杯、转子和量筒,向一个烧杯装少量去离子水(约100ml)并放入一个转子后放在称量天平旁备用;向另一个烧杯装约800ml去离子水并在微波炉或者水浴锅(65°以上均可)中加热。注意:由于实验室所购买的Na2HPO4常常带有二水、七水或者十二水,与之对应的重量分别为1.78g、2.68g、3.58g。向烧杯中加入预热的去离子水,烧杯放置在磁力搅拌器上搅拌溶解。用量筒定容到1L,保存备用。取100ml10X的PBS母液,加入900ml去离子水即可获得pH=7.4的PBS缓冲液(无需用pH计校准PH值)。长时间或过量使用PBS缓冲液可能会对人体产生耐受性,导致恶心、呕吐、腹泻等症状。河北有酚红缓冲液哪家好
生化实验中加入缓冲液的目的和作用。浙江有酚红缓冲液价格查询
假设缓冲溶液里含有弱酸HA以及它的共轭碱。在溶液里发生的质子反应为:水合氢离子的浓度取决于弱酸与其共轭碱的浓度比。当加入少量强碱时,酸被中和,导致了氢氧根离子在溶液中很少累积,从而的浓度增加,的浓度减少。可以看到,虽然加入了强碱,但是溶液里的氢氧根离子变化很少,同时, 浓度较大,相对的变化小,两者比值几乎无变化,因此根据公式,水合氢离子的浓度变化很小。加入弱酸则是同样的道理。由于在 大浓度基数上的微小变化不会改变比值,也因此维持了体系内氢离子和氢氧根离子浓度的平衡。 [1]浙江有酚红缓冲液价格查询