湖北MEM a培养基技术指导

    另外，酚红作为pH值的指示剂被加入到细胞培养基中。酚红在产物纯化过程中会造成干扰，并且具有一定的固醇类***样作用，如雌***样作用。当用于哺乳类动物细胞的培养，可能会发生一些固醇类反应。现在商业化细胞培养基中的酚红含量可根据需求调整。因生物反应器具有pH在线检测技术，生物反应器培养动物细胞时，酚红可完全去除。细胞保护剂是保护细胞免受渗透压变化、剪切力、氧化及气泡作用等引起的损伤的物质。在使用生物反应器培养动物细胞时，细胞易被机械搅拌和通气鼓泡产生的流体剪切力和气泡作用所伤害甚至破损死亡。为降低这种损伤，除优化生物反应器结构和生产工艺外，可在细胞培养液中添加一些保护剂。其主要是通过改变细胞培养基物性或是对细胞具有保护作用的物质，常用的种类有血清、白蛋白、聚已二醇（PEG）、非离子性表面活性剂PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.细胞培养基的理化性质动物细胞在细胞培养基中不仅能存活，还要分裂增殖，合适的渗透压、pH值等理化性质是细胞培养基必须具备的前提条件。动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，适宜pH在～。细胞培养基的pH值通常需经校正的pH计来测定。在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强。MEM培养基在细胞生物学研究中广泛应用。湖北MEM a培养基技术指导

    导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中**和霉菌，是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华******典》2005版二部附录第100页的口服给*制剂的微生物限度标准，并严于该标准，规定细胞培养基产品的**数每1g不得超过200个，霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1g，加入无菌纯化水10mL溶解，混匀即得试样。按中华******典2005年版二部附录ⅪJ微生物限度检查法进行，检查项目为**数、霉菌数。检查法采用平皿法。细胞生长试验这是一个性能特性表述的要求。细胞培养基的功能就是培养哺乳类动物细胞，因此经过细胞培养效果的检验是产品***劣的直观表述，这也是很多生物制*用户要求的一项指标。目前国内尚无细胞培养和计数的法定方法，可参考《体外培养的原理与技术》中细胞计数法论述的内容给出。按产品说明书配制培养液进行细胞培养，前四天用含10％小牛血清的培养液培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基是否有促生长的能力。后三天用不含小牛血清的培养液维持培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基中是否有不利细胞生长的***。本试验用细胞为VERO细胞。四、细胞培养基的使用方法细胞培养基的种类繁多，细胞培养方式也较多。广东F12培养基包括什么无血清培养基确保了实验结果的纯净性。

    但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡，影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统，此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量，是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系（株）不同，同一株细胞适应环境也可能不同（细胞耐受性不同等），且存在的地域性水质差异等，在实际生产过程中也可稍作改动，但使用者需做相应的检测（理化及细胞生产试验等）。HEPES是一种非离子缓冲液，在pH～，在高浓度时对一些细胞可能**。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠（g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10～25mmol/L。**酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖的条件下，细胞也可以代谢**酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃下放置1周可分解50%，使用中**好单独配制，置-20℃冰箱中保存，使用前加入细胞培养液中。

    文献2“混合硝酸稀土对谷氨酸产生菌的影响，氨基酸杂志”发现，在发酵培养基中添加一定量的稀土元素，能够提高谷氨酸的产量。申请人之前的**技术“一种谷氨酸发酵培养基制备方法”，在常规培养基的基础上进行了改进，通过添加菌体蛋白浸膏来替代酵母膏氮源，不但节约了成本，还能提高氨基酸发酵产率，一举两得。技术实现要素：在已有发酵培养基的基础上，申请人针对微生物发酵的特点，继续进行了改进，以提高发酵效率，据此，提出了一种优化的谷氨酸发酵培养基。本发明是通过如下技术方案来实现的：一种优化的谷氨酸发酵培养基，其包括发酵培养基a和发酵培养基b；所述发酵培养基a首先添加，然后间隔12h以上添加发酵培养基b。进一步地，所述发酵培养基a的制备方法为：取各原料：葡萄糖，酵母浸膏，k2hpo4，mgso4·7h2o，2-羟基乙胺，cecl3，mnso4·h2o，feso4·7h2o，vb1，生物素；将各原料搅拌均匀后，调节ph，**，制得发酵培养基a。进一步地，所述发酵培养基b的制备方法为：取各原料：琥珀酸，尿素，壳聚糖；将各原料搅拌均匀后，调节ph，**，制得发酵培养基b。推荐地，所述发酵培养基a的制备方法为：取各原料：葡萄糖50-100g/l，酵母浸膏10-30g/l，k2hpo41-5g/l。减血清培养基提高了实验的可重复性。

    3)培养方法：将配制的1/2cs生长培养基分装于长、宽、高9cm的耐高温培养盒中，用移液枪吸取带有无菌水的无菌种子，吹打在无菌滤纸上，用无菌尖头镊子将种子均匀点播在培养基上；于温度22-24℃、湿度50-70％、光照强度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照时间16h、黑暗时间8h)条件下培养。(4)1/2cs生长培养基的培养结果为：哥伦比亚型拟南芥种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100％，培养16d的幼苗，表现为植株健壮，莲座叶均已伸展，叶色浓绿，根系发达、平均主根长为。如图1所示。对比培养例1：将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基，其余完全同培养实例1，1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为：哥伦比亚型拟南芥种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100％，培养16d的幼苗，表现为植株健壮，莲座叶部分伸展，叶色浓绿，根系发达、平均主根长为。如图1所示。培养实例1和对比培养例1的培养结果比较：哥伦比亚型拟南芥在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100％；在相同条件下培养16d时，与1/2ms生长培养基相比，1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳，主要表现为莲座叶长势更好、根系更为发达。如图1所示。MEM培养基适合多种类型的细胞培养实验。广东F12培养基包括什么

MEM培养基在细胞培养中表现出良好的稳定性。湖北MEM a培养基技术指导

    拟南芥根愈伤**诱导时，培养6-9d在切口处开始出现少量颗粒状愈伤**，培养20-22d获得淡黄色松脆型愈伤**，在愈伤**周围观察到大量致密分布的白毛，颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100％。如图5所示。培养实例5和对比培养例5的诱导结果比较：用上述方法进行哥伦比亚拟南芥叶片和根愈伤**诱导时，cs诱导培养基与ms诱导培养基的颗粒状愈伤**诱导率及愈伤**总诱导率均为100％，但cs诱导培养基的愈伤**出愈时间比ms诱导培养基提前至少1d；在相同培养条件下，与ms诱导培养基相比，经cs诱导培养基诱导的叶片团块状愈伤**更大、诱导的根愈伤**更多。如图5所示。培养实例6：本氏***叶片及根愈伤**诱导培养实例6与培养实例5不同的地方在于，步骤(1)将；步骤(2)将2,；步骤(3)所取叶片为本氏***无菌苗叶片，用手术剪刀将无菌叶片剪成，用镊子将其平铺于诱导培养基；步骤(4)所取根为本氏***无菌苗的根，cs诱导培养基的诱导结果为：本氏***叶片愈伤**诱导时，培养15-18d的叶片明显增大增厚，叶片四周产生大量的淡绿色致密的愈伤**，愈伤**诱导率为100％，且在愈伤**团块上已开始产生多个嫩绿色的不定芽；本氏***根愈伤**诱导时，培养9-11d在切口处产生大量淡黄色致密的愈伤**。湖北MEM a培养基技术指导