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在细胞培养过程中，经常少不了HEPES缓冲液。那么，HEPES缓冲液的配制和使用方法怎样呢?HEPES缓冲液是一种弱势，在开放式的培养条件中，若加入HEPES，可防止培养基内pH氧化升高，从而将PH维持在7.0左右。HEPES分子量为238.31，化学名：4-羟乙基哌嗪乙磺酸，分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物缓冲剂，pH值缓冲范围：6.8-8.2，用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒里。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L。艾伟拓稳定供应注射级海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保护剂与缓冲盐！云南试剂级HEPES医院采购

（5）缓冲溶液在稳定性方面各显利弊：①Tris-HCl缓冲溶液pH值受外界影响较大，一般现用现配。同时需要注意Tris是一级脂肪胺，分子结构中的氨基易与醛类化合物发生缩合反应，是一些生化实验的抑制剂。②硼酸盐缓冲液有一定毒性，不宜用做注射液或者口服液的缓冲液。③虽然磷酸盐缓冲溶液稳定性很好，但磷酸根具有一定的络合能力会抑制一些与金属离子有关的生化反应。④HEPES缓冲溶液是较理想的生物缓冲剂，但其有多种生物学效应，如：缩短血液凝固时间、减缓平滑肌收缩频率以及阻断细胞膜上的阴离子通道等，在一定程度上会影响患者身体状态，使用时应需注意。药用HEPESAVT长期稳定供应注射级海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保护剂与缓冲盐！

HEPES的使用方法：1)HEPES可以按所需浓度直接加入制备的培养液中进行过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，溶解后用lNNaOH调节ph7.2，过滤除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10mmol/L。2)亦可配成100x贮存液(lmol/L)，使用前取99ml培养液加入lml贮存液，*终应用浓度仍为10mmol/L。lmol/L(100x)HEPES贮存液配制方法：取23.8gHEPES溶于90ml双蒸水中，用lNNaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)是一种两性有机化学缓冲剂，属于“Good”缓冲液的一种，是NormanGood博士和他的同事在1966年描述的一系列缓冲剂(G生物化学1966)的衍生物。“Good缓冲液”如HEPES具有以下特征：pKa值介于6.0和8.0之间高溶解度膜不通透性对生化反应影响有限极低的可见光和紫外光吸收耐化学作用和酶解作用易于制备HEPES广泛应用于多种生物化学反应，并在某些细胞培养基中用作缓冲试剂。艾伟拓注射级HEPES现货供应艾伟拓稳定供应注射级海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保护剂与缓冲盐。

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关于HEPES缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：一、500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的配制119.15gHEPES溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5MNaOH水溶液调节pH值，***定容。三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制将1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml的蒸馏水，用0.5MNaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。云南试剂级HEPES医院采购

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