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外泌体的来源与特征：外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体，通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成，其大小均一，直径为40-100nm，密度为1.10-1.18g/mL。外泌体可由间充质干细胞、淋巴细胞和肿细胞细胞等多种类型细胞主动分泌释放。外泌体内主要含有核酸、蛋白质和脂质等，可作为疾病诊断标记物、调控靶细胞功能、参与细胞生物学活动等。例如：含有miR-140-5p的滑膜间充质干细胞来源外泌体(SMSC-Exo影响软骨组织再生；骨髓间充质干细胞来源外泌体携带的miR-196a可调节成骨细胞分化促进大鼠颅骨缺损的骨再生。外泌体作为核酸的药物递送载体。外泌体的细胞源：人体中几乎所有类型的细胞均能产生外泌体。辽宁外泌体label free

尺寸排阻色谱法（SEC）根据大小来分离样本。该技术应用了一个装有多孔聚合物珠的色谱柱，该聚合物珠包含多个孔和通道，分子根据其直径穿过。半径小的分子穿过柱子的孔迁移需要较长的时间，而大分子则较早地从柱子上洗脱下来。SEC可精确分离大分子和小分子。与离心分离方法相比，SEC分离的外泌体不受剪切力的影响，剪切力可能会改变囊泡的结构。此方法分离到的外泌体纯度较高，在电镜下大小均一，但是获取量少，所需设备特殊。此外，SEC方法与超滤相结合已被用于尿液来源的外泌体的分离和分析。北京CD81外泌体慢病毒包装外泌体中常见的细胞质蛋白是Rabs蛋白，是鸟苷酸三磷酸酶家族的一种。

外泌体生物学功能：1、在心血管系统中，据报道，源自人胚胎干细胞（ESC）的间充质干细胞（MSC）外泌体可减少小鼠和猪模型中的心肌缺血和再灌注损伤；2、在免疫系统中，据报道趋化因子受体CCR5通过外泌体在细胞之间转移是细胞人类免疫缺陷病毒传染的一种机制；3、在中枢的神经系统（CNS）中，外泌体的作用是消除废物并介导大脑活动，从而阻止神经退行性疾病的发病机理；迄今为止，尚未完全发现调节外泌体-细胞结合的途径。然而，比较明显，其结合过程从外泌体识别受体细胞PM上的特定受体开始。膜受体的识别是外泌体细胞反应的基础，它可能活跃受体并随后导致相关信号通路的活跃，外泌体与PM融合或外泌体的内吞作用，从而导致蛋白质和RNA直接释放到受体细胞中。

外泌体的提取、纯化和鉴定：每一个外泌体研究者较初都要为外泌体的分离提取而烦恼。选择的分离方式是利用超速离心的方式分离外泌体，并且可以选用梯度密度离心法得到纯度更高的外泌体。另外利用外泌体自身的物理化学性质所研发的各种市售的外泌体分离提取试剂盒也能达到分离效果。提取的外泌体的鉴定方式主要是通过形态学（电子显微镜技术）、粒子大小以及标志蛋白等方式实现的。近来的研究发现外泌体在比较多生理病理上起着重要的作用，如免疫中抗原呈递、瘤子的生长与迁移、组织损伤的修复等。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能，可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体具有脂质双层膜结构，能比较好的保护其包被的物质，且能靶向特定细胞或组织，因此是一种比较好靶向给药系统。外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、促进瘤子发生和转移等作用。

免疫印迹或蛋白质印迹是分析外泌体较常用的方法之一，其原理是外泌体上特异性抗原与抗体结合。首先对样品进行处理将囊泡裂解并将蛋白质变性，变性后，通过SDS-PAGE分离蛋白质，然后将其转移到硝酸纤维素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于针对目的抗原的抗体中。抗体特异性识别膜表面上的抗原，然后将膜暴露于第二抗体中。通过二抗的荧光标签或与二抗偶联的辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶基团进行检测。常用的标记蛋白为CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特异性和重复性会受到所用抗体质量的限制。外泌体的直径比微泡的要小，后者直径为100nm-1μm。一个推测的作用是外泌体可能从细胞中去除多余和/或不必要的成分以维持细胞内环境的稳定。广州外泌体粒径检测

1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现。辽宁外泌体label free

PEG沉淀法分离外泌体：通常通过将无水聚合物，如聚乙二醇（PEG），与样品混合来沉淀外泌体。PEG聚合物竞争性结合水分子，增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力从而沉淀外泌体，然后通过离心分离外泌体。这种分离的方法快速，简便，可用于各种起始体积（从100μL到几毫升）适合于各种研究和临床设定。然而，这种方法缺乏选择性，PEG聚合物不只会导致外泌体小泡沉淀，还会引起其他细胞外囊泡、细胞外蛋白质和蛋白质聚集体沉淀。因此，在使用这种方法之前，必须进行样品预处理，例如过滤或超速离心，以减少较终的外泌体制剂的污染。辽宁外泌体label free

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