培养基条件中盐核酸酶

病毒载体作为细胞药物生产的关键原材料，直接关系到细胞产品质量。载体质量的控制和工艺稳定性和批间一致性都是关系到产品能否产业化的关键。在生产纯化过程中，需要去除上游过程中的培养基成分、诱导剂、宿主蛋白和核酸等杂质，但是由于逆转录病毒颗粒比较大，高异质表面糖蛋白，而且活性易于受剪切影响，对下游纯化提出了巨大的挑战。目前病毒载体纯化方法包括超速离心、离子交换层析、分子排阻层析、亲和层析、渗滤等。各种方法各有利弊，就产业化而言，离子交换纯化效果比较好，条件易于摸索，易于规模放大。ArcticZymes Technologies的研发基于北极海洋区的自然资源；培养基条件中盐核酸酶

宿主细胞DNA残留的担忧是基于致ai风险理论，特别是生产细胞系所包含的致ai序列，比如较常见腺病毒基因E1A和E1B（HEK293, PerC.6 和CAP 细胞系），人乳tou瘤病毒E6和E7基因（HeLa细胞系)等。当使用致ai细胞系生产AAV时，下游纯化须尽可能减少残留DNA。工业上一般使用核酸酶分解残留DNA，普遍认为小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai风险。宿主细胞蛋白残留与免疫原性、炎症或过敏性休克有关。尽管与非人类的生产原料相比（非人类细胞系如BHK21或昆虫细胞，以及辅助病毒如HSV、腺病毒、杆状病毒），人类细胞免疫原性比较弱。黑龙江上海倍笃生物中盐核酸酶70950-150M-SAN HQ中盐核酸酶生产符合ISO 13485:2016规范，提供相关文件用于申报。

在生物工艺中，核酸酶的主要作用是高效消化宿主细胞DNA（HCD），并将其分解成足够小的片段，以便在下游纯化过程中去除。虽然大多数核酸酶可以在生理盐条件下高效地将裸DNA降解成微小片段，比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸链，但实际生产中的核酸污染情况更加复杂。HCD通常以染色质形式存在，与细胞裂解碎片、病毒颗粒等结合在一起，影响核酸酶的识别及剪切。因此，HCD去除的关键在于——核酸酶如何在复杂的生产体系中识别并剪切HCD。

慢病毒大规模纯化的捕获步骤包括：膜过滤澄清，随后切向流过滤/超滤或者体积排阻色谱浓缩。此外，需用核酸酶（benzonase或M-SAN HQ中盐核酸酶）来去除细胞残留的、质粒来源的DNA污染。这两个步骤顺序可以调整，依据项目工艺而定。两种工艺路线各有优缺点：先用核酸酶消化的优点是可去除大的DNA片段，且后续步骤可以去除残留核酸酶；但所用的核酸酶的量也非常大。与此相反，将核酸酶步骤后置的优点是大幅降低核酸酶的量(成本降低)；但后面的步骤必须有将核酸酶去除的能力。此外，后期用核酸酶的缺点是核酸污染可能会结合慢病毒颗粒形成沉淀，进而导致慢病毒在纯化中流失，从而影响得率。M-SAN HQ ELISA kit具有高精确度及高准确度。

​通过三质粒瞬转体系生产病毒载体，会引入宿主细胞DNA残留（HCD）、蛋白残留（HCP）、工艺杂质（如antibiotics、核酸酶等外源物质）等污染，存在潜在的致瘤性和免疫原性等风险。药品监管机构一般允许生物制品中存在10ng/dose以下的残留DNA。此外，根据杂质来源、工艺以及产品类型不同，也会对HCD限度做不同要求。为了达到这个要求，一般通过核酸酶处理和色谱联用的方法。一般在细胞培养液裂解/收获、澄清收获及超滤浓缩等环节加入核酸酶处理，需要工艺摸索来确认处理方式。中盐核酸酶具有纯度高（≥99%）、 内毒水平低（<0.25EU/1kU）的特点；湖南上海倍笃生物中盐核酸酶70950-202

生理盐浓度下，M-SAN HQ中盐核酸酶性能优于常用核酸酶，对HCD的去除有些本质区别。培养基条件中盐核酸酶

经过多年的经验积累及市场积淀，倍笃生物已组合多条不同产品线，分别满足体外诊断、organoid及干细胞、细胞基因药物等领域的需求。其中，细胞基因药物领域产品线包含SAN HQ高盐核酸酶及M-SAN HQ中盐核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP级MSC/PSC培养基、GMP级胶原酶、AAV滴度检测产品、工艺杂质及外源污染物残留检测产品、AAV中和抗体蛋白酶等；相关品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德国BASF、德国Sartorius、德国Nordmark、瑞典Genovis、中国君研生物等。培养基条件中盐核酸酶

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