广州RIP免疫沉淀外包公司
时间：2024年07月11日
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免疫共沉淀分析（Co-IP）实验原理与IP十分类似，基本的技术都是采用目标抗原特异性的固相化抗体；但IP的目标是纯化单一抗原，而Co-IP旨在分离抗原及与抗原结合的蛋白质或配体。
在Co-IP实验中，已知抗原称为诱饵蛋白，与之结合的蛋白则称为靶蛋白。靶蛋白可能是一些复杂的伴侣蛋白、信号分子、结构蛋白、辅助因子等，蛋白间相互作用强度范围可能介于高度瞬时和十分稳定之间。基本的Co-IP实验方案与IP相同，实际上任何IP系统均可用于Co-IP。但是，还有许多其他因素需要考虑，例如，结合和洗涤条件的优化，优化时，需要考虑到诱饵蛋白-靶蛋白的相互作用强度以及抗体-诱饵蛋白的亲和力。
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免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种利用抗体与特定蛋白质结合的特性，从复杂样本中分离和纯化目标蛋白质的实验方法。这项技术在生物医学研究中有着广泛的应用场景，以下是一些主要的应用领域：
1. 蛋白质相互作用分析：通过免疫沉淀技术，研究人员可以研究蛋白质之间的相互作用，揭示蛋白质复合物的组成以及它们在细胞内的功能和调控机制。
2. 抗体药物开发：免疫沉淀技术可以用于研究抗体药物与其靶标蛋白的结合特性，评估抗体药物的亲和力和特异性，指导抗体药物的设计和优化。
3. 蛋白质表达水平分析：通过比较不同条件下的免疫沉淀结果，可以评估目标蛋白的相对量，进而研究蛋白质的表达调控。
4. 染色质免疫沉淀（ChIP）：这是一种特殊的免疫沉淀技术，用于研究蛋白质与DNA的相互作用，如转录因子或组蛋白修饰与基因组特定区域的结合情况。
5. RNA免疫沉淀（RIP）：类似于ChIP，RIP用于研究RNA结合蛋白与RNA分子之间的相互作用。
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免疫沉淀技术RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的实验方法基于以下几个关键步骤：
1. 细胞裂解：首先，细胞或组织样本被裂解，以释放细胞内的蛋白质和RNA复合物。
2.抗体特异性结合：裂解后的样本中加入针对特定RNA结合蛋白的抗体。这些抗体能够特异性地识别并结合到目标蛋白。
3. 免疫复合物形成：抗体与目标蛋白结合后，形成抗体-蛋白质-RNA复合物。
4. 亲和介质捕获：使用蛋白A或蛋白G结合的珠子（如琼脂糖或磁性珠子）来捕获这些抗体-蛋白质-RNA复合物。蛋白A或蛋白G能够与抗体的Fc部分结合，从而拉下与之结合的复合物。
5. 洗涤：捕获的复合物被洗涤以去除未特异性结合的蛋白质和RNA。
6. RNA分离和分析：从珠子上洗脱或消化复合物，分离出RNA，并进行进一步的分析，如qPCR、Northern blot或高通量测序（RNA-Seq）。
ChIP（染色质免疫沉淀）实验是一种用于研究蛋白质与DNA相互作用的技术。以下是ChIP实验的实验方法概述：
1. 交联：将细胞与交联剂（如1%甲醛）孵育，通常在室温下进行10-15分钟。
2. 终止交联：添加甘氨酸以终止交联反应，孵育5分钟。
3. 收集细胞：通过离心收集细胞，并用PBS洗涤以去除交联剂。
4. 细胞裂解：使用裂解缓冲液裂解细胞，释放染色质。
5. 染色质剪切：使用超声波或酶消化将染色质剪切成适当大小的片段。
6. 免疫沉淀：将剪切后的染色质与特异性抗体孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。
7. 洗涤：用低盐、高盐和LiCl洗涤液洗涤磁珠，去除非特异性结合物。
8. 洗脱：用洗脱缓冲液洗脱DNA。
9. 逆转交联：用蛋白酶K处理，然后在65°C下加热过夜以逆转交联。
10. DNA纯化：使用商业试剂盒或标准酚/氯仿方法纯化DNA。
11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA，或进行测序以确定蛋白质结合位点。
免疫沉淀技术ChIP的实验方法。
免疫沉淀实验步骤：
1. 样品制备
a. 悬浮细胞样品处理：离心收集细胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
b. 贴壁细胞样品处理：移去培养基，用PBS清洗细胞两遍；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5mL EP管内，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制剂的裂解液（裂解液应在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂Cocktail，使蛋白酶抑制剂Cocktail的终浓度为1×）。吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。
4. 后续：磁珠预处理——抗体吸附——抗原结合反应——抗体洗脱
免疫沉淀技术IP的应用有哪些？上海ChIP免疫沉淀磁珠原理免疫沉淀技术IP的原理是什么？广州RIP免疫沉淀外包公司
免疫沉淀技术（Immunoprecipitation, IP）是一种用于研究蛋白质相互作用、蛋白质复合物组成以及特定蛋白质的表达和纯化的实验技术。
基本原理
免疫沉淀技术基于抗体与特定蛋白质（抗原）之间的特异性相互作用。通过使用针对目标蛋白质的特异性抗体，可以从含有多种蛋白质的复杂样本中捕获并富集目标蛋白质。
免疫沉淀技术有多种类型，包括：
1. 个别免疫沉淀法（Individual IP）
2. 免疫共沉淀法（Co-IP）
3. 染色质免疫沉淀法（ChIP）
4. RNA免疫沉淀法（RIP）
近年来，免疫沉淀技术在固相支持物的选择上有了很大进步。磁性微珠因其操作简便、快速和自动化程度高而逐渐取代了传统的琼脂糖树脂。
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