昆明哺乳动物纺锤体提高冷冻保存效率

核移植，又称体细胞核移植，是一种将体细胞的细胞核移入去核卵母细胞中的技术。这一技术的关键在于确保移植后的细胞核能够在卵母细胞内重新编程，恢复全能性，并引导后续的胚胎发育。自1996年克隆羊“多莉”诞生以来，核移植技术便引起了全球范围内的关注与研究热潮。纺锤体是卵母细胞在减数分裂过程中形成的关键结构，负责精确分离染色体，确保遗传信息的正确传递。然而，纺锤体对外部环境极为敏感，容易受到冷冻过程中温度波动、渗透压变化及冷冻保护剂毒性等因素的影响而发生损伤。因此，纺锤体卵冷冻技术的成功与否，直接关系到核移植后胚胎的发育潜力和质量。纺锤体在细胞分裂后期通过收缩力推动染色体分离。昆明哺乳动物纺锤体提高冷冻保存效率

在核移植过程中，纺锤体的稳定性是首要考虑的问题。冷冻和解冻过程中的温度变化和冷冻保护剂的毒性都可能对纺锤体造成损伤，导致染色体分离异常，进而影响胚胎发育。因此，如何在冷冻过程中保持纺锤体的稳定性，是核移植纺锤体卵冷冻研究面临的重要挑战。体细胞核在移入去核卵母细胞后，需要经历复杂的重新编程过程，以获得全能性。然而，这一过程受到多种因素的调控，包括表观遗传修饰、转录因子表达等。在冷冻过程中，这些调控机制可能受到干扰，导致重新编程失败或异常，从而影响胚胎发育。香港克隆纺锤体卵细胞评价纺锤体的功能异常可能导致细胞分裂错误，引发遗传疾病。

纺锤体观测仪使ICSI更加安全可靠

在进行单精子卵胞浆内注射（ICSI）授精时，**初人们观察人体内成熟的卵母细胞时，通常认为，卵母细胞纺锤**于***极体附近，故传统的ICSI操作是转动卵母细胞使其***极**于6点或12点处，然后在3点处注入精子。但是，在大量使用纺锤体观测仪后发现，***极体并不能很好地预测纺锤体的位置。一项研究提示，在ICSI后，用纺锤体观测仪观察纺锤体与***极体的夹角，结果发现小于30°这组卵母细胞的正常受精率更高。极体在卵周隙中的移动，或者纺锤体在胞质中的易位都使两者的位置关系发生改变，普通光学显微镜下ICSI穿刺部位的选择，可能会损伤纺锤体和(或)造成染色体的异常。通过纺锤体观测仪，可以精确地对卵母细胞中纺锤体的位置进行定位，从而避免在ICSI过程中损伤纺锤体，使ICSI更加安全可靠。有文献报道，在进行ICSI时，观察到“双折射纺锤体”的成熟卵母细胞的受精率和质量胚胎率***高于未观察到双折射纺锤体组。也有学者发现，有些卵母细胞在普通光学显微镜下看到是正常的，但在纺锤体观测仪这个“照妖镜”下，就能显出原形，表现为有***极体、但缺乏双折射的纺锤体，这类卵母细胞ICSI后的受精率和妊娠率极低。

纺锤体观测仪在补救ICSI中的应用

我们知道，成熟的卵母细胞排出***极体。IVF加入精子后，精子会穿透层层障碍**终进入卵子，随着时间的推移，卵子的纺锤体会将染色单体拉向两极，进而排出第二极体，再往后大约加精后9-16小时，雌雄原核会出现，而原核的出现才是受精的标志。但是对于那些没有受精的卵子，到了原核出现的时间窗，发现没有受精时再去补救ICSI，往往错过了卵子的比较好受精时间，因为没有受精的卵子会在体外老化，即使受精，胚胎的发育潜能也很低。所以，我们在加精后的4-6小时，通过观察第二极体的排出来初步判断是否受精，**的增加了那些受精障碍患者的受精率，也避免了卵子的老化。

当然，偶尔也会出现错误补救。文献报道对IVF受精后的未排出第二极体的卵母细胞进行ICSI补救，实验组用纺锤体观测仪观察并统计纺锤体的数目，82.7%含有一个纺锤体，17.3%含有两个纺锤体，并对含有一个纺锤体的卵母细胞进行补救ICSI；而对照组并未用纺锤体观测仪观察纺锤体，只对未排出第二极体的卵母细胞进行补救ICSI。结果发现，使用纺锤体观测仪观察纺锤体的数目能显著提高正常受精率，降低多原核受精比率。 纺锤体微管的数量和分布随细胞分裂阶段而变化。

哺乳动物卵母细胞的纺锤体由微管组成，这些微管结构精细且高度动态，对温度、渗透压和机械力等外界因素极为敏感。在冷冻过程中，纺锤体容易因冰晶形成、渗透压变化或机械损伤而遭到破坏，导致染色体分离异常，进而影响卵母细胞的发育潜力和受精后的胚胎质量。选择合适的冷冻保护剂是减少纺锤体损伤的关键。然而，不同浓度的冷冻保护剂对纺锤体的影响各异，且不同哺乳动物种类之间也存在差异。因此，需要通过大量实验来优化冷冻保护剂的配方，以大限度地保护纺锤体的完整性。纺锤体在细胞分裂后期通过微管切割机制实现染色体分离。昆明卵母细胞纺锤体卵细胞评价

纺锤体在细胞分裂后期推动染色体向细胞两极移动。昆明哺乳动物纺锤体提高冷冻保存效率

在生殖医学与辅助生殖技术的快速发展中，卵母细胞的冷冻保存技术显得尤为重要。然而，卵母细胞，尤其是其内部的纺锤体结构，对低温环境极为敏感，冷冻过程中的损伤往往影响解冻后卵母细胞的存活率及发育潜能。偏光成像技术，特别是Polscope偏振光显微成像系统，结合了液晶可变减速器、电子成像及数码成像技术，能够捕捉到具有双折性特征的细胞结构，如纺锤体。纺锤体由微管等高分子物质有序排列而成，这些物质能够使偏振光发生折射现象，从而被检偏器捕捉并通过偏振光显微镜观察。这一技术无需对细胞进行固定和染色，能够动态评估卵母细胞的质量与纺锤体的相关性，为卵母细胞冷冻保存的研究提供了新的手段。昆明哺乳动物纺锤体提高冷冻保存效率