Hamilton Thorne精子分析W.H.O 5

前沿性检查：目前不作为生育力低下男性初步评估的常规方法。这一部分包括了非常专业化的、主要用于研究的方法和其他新兴检测技术。有研究认为，氧化应激可能是影响人类精子功能和妊娠结局的重要因素；新的证据也表明了精子DNA完整性和染色质组装与生育力的关系。前沿性检查一节中详细介绍了精子氧化应激和活性氧实验、精子染色质检测(苯胺蓝和色霉素A3染色)的具体实验操作及讨论。手册重写了计算机辅助精子分析(CASA)部分，强调了CASA对于检测精子浓度的局限性与质控要求，增加了CASA检测精子超活化运动的内容。对精子跨膜离子流和转运的功能分析，可更好地了解男性不育因素和男性生殖***疾病。为此，手册新增了检测精子跨膜离子流和转运的内容。CASA系统操作简便，检测速度快，且重复性优于人工检测。Hamilton Thorne精子分析W.H.O 5

人类精子冷冻保存和储存：增加了冷冻样本的安全性、精液冷冻保存方案、快速液氮熏蒸冷冻、冷冻精液的解冻、玻璃化冷冻等内容，更具可操作性。本手册对人类精子的冷冻保存提出了具体建议：将样本分管分罐分开储存；对使用的材料和留存标本建立定期核验程序；所有储罐都应有液位监控报警系统，以监测温度和液氮液位，传感器应连接警报器，可通过实验室人员的终端进行提醒。新证据表明，玻璃化冷冻是冷冻保存精液的一种有价值的方法。该方法的原理是将小体积样本与无污染液氮直接接触并快速冷冻，可以防止冰晶的形成，并减少精子的渗透性损伤。在麦管玻璃化冷冻(无菌玻璃化冷冻)中，也可以使用封闭系统，不需要无菌的液氮。美国绵羊精子分析精确温度控制Hamilton Thorne精子分析仪具有良好的数据管理和报告生成功能，能够方便用户查阅和分享分析结果。

扩展性检查：可以在某些情况下由实验室选择或根据临床医生的特殊要求而使用的项目。手册增加了精子DNA损伤、遗传学和炎症细胞等相关检查项目。提出了基因突变是导致不育和精液常规检查异常的原因。新增了精液相关细胞因子、趋化因子等检测的方法、试剂、检测步骤等内容。在精液参数异常的男性中普遍存在精子DNA损伤，并且已有报道指出其与精液参数正常男性的不育有关。由于与精液质量相关，精子DNA损伤检测是男性不育检查中的重要补充内容，已成为男科学基础和临床中论述**多、**有前景的精子损伤分子标志物之一。本版手册增加了大量篇幅对其原理和检测方法进行了描述。新增了基因和基因组测序内容。临床上，越来越多的人意识到染色体异常[数量异常、结构异常(包括微缺失和微重复)]和基因突变是导致各种男性不育症的基础病因，而这正是在精液分析中观察到的许多异常的原因。尽管基因和基因组测序常规在医学遗传学实验室进行，但一些男科实验室也在做同样的检测。为明确生殖道炎症对于男性不育的影响，泌尿男科医生可能提出对精液中的趋化因子和细胞因子进行评估。本手册纳入了精液中白细胞介素检测方法。

精子分析仪工作原理

以灰度识别CASA为例，采用高分辨率的摄影技术与显微镜结合，**标本液化后吸入计数，通过显微镜放大后，用图像采集系统获取精子动、静态图像后输入计算机。根据设定的精子大小和灰度、精子运动移位及运动参数，对采集图像进行精子密度、活动力、活动率、运动特征等几十项检验项目动态分析，由计算机处理后，打印出“**分析检查报告以及精子动态特征分布图”。一次能对1000个精子进行动态检测分析，2-3分钟即可完成检测 [1]。

优点：

操作简便，用量少，检测速度快，重复性优于人工检测，并且能够快速、准确的测定精子密度、活力、精子分级等，还可提供精子运动状态的多种参数等。

缺点：

影响分析结果的因素较多，除**本身性质所含的固有误差外，不同的精子计数池的相对准确性和精确性可产生明显不一致的效果。 男性精液检测主要依赖计算机辅助精子分析仪(computer assistant semen analyses，CASA)。

精子计数是在显微镜下计算一次排出的精液中精子的数量将精子计数值乘以精液量就可得出一次**的量。

精液液化后将样本按一定比例稀释和固定后，滴于血细胞计数板上，在显微镜下计数红细胞计数区内的所有精子数并换算为每m1内所含精子数。此外还可用电子细胞计数仪经调整阈值设置后计数精子数量。

将已经液化的精液标本均匀混合，用白细胞计数吸管吸精液至0.5刻度，再吸稀释液至11刻度，振荡三分钟，然后置于血球计数板内，计数二大格（每格面积1平方毫米）之精子数，在尾数后加5个“0”即得每毫升精液内精子数。例如计数为1280个，则每毫升精子应为128,000,000。精液稀释液之配制：重碳酸钠5克、福尔马林1毫升、蒸馏水加至100毫升。稀释液内重碳酸钠有消化粘液的作用，福尔马林有使精子制动的作用。如精液之稠度过高而不易吸取时，可以精液1毫升混匀于稀释液19毫升内，稀释后进行计数。如精子的数目极少，亦可改为稀释10倍计数。每次排精75%的精子是从附睾尾部所贮存的，还有25%是由输精管道的其他部分来的，因此单凭一次排精的精子计数来衡量睾丸生精机能是不***的。只有在排精后间隔4-5天以后多次精液检查，才能比较正确地从这些精子计数来反映睾丸的生精机能。 精子分析系统较传统的分析法比较，具有速度快、量比性好、准确性高、为临床和科研提供客观的检测依据。快速运动精子分析W.H.O 6

CASA系统减少了人为因素对检测结果的影响，提高了检测的客观性和可重复性‌。Hamilton Thorne精子分析W.H.O 5

五、精子活动力检测[正常参考值]**后30-60分钟活动力为Ⅲ级以上的精子＞0.80：**后120分钟内活动力为Ⅲ级以上的精子＞0.60；**120分钟后0.25-0.60的精子仍能活动。[临床意义]活动不良或不活动的精子增多，是导致不育的重要原因之一。常见于精索静脉曲张、泌尿生殖系的非特异性***如大肠杆菌***，某些代谢药、抗疟药、雌***、氧化氮芥等，也可使精子活动力下降。六、精子计数[正常参考值](100-150)×109/L或一次排精总数为(4-6)×108。[临床意义]1．精子计数小于20×109/L或一次排精总数少于1×108为不正常，见于精索静脉曲张、铅金属等有害工业污染、大剂量放射线及某些药物影响。2．精液多次未查到精子为无精症，主要见于睾丸生精功能低下，先天性输精管、精囊缺陷或输精管阻塞。输精管结扎术2个月后精液中应无精子，否则说明手术失败。3．老年人从50岁开始精子数减少以至逐步消失。Hamilton Thorne精子分析W.H.O 5