计算机辅助精子分析精确温度控制

精子计数是在显微镜下计算一次排出的精液中精子的数量将精子计数值乘以精液量就可得出一次**的量。

精液液化后将样本按一定比例稀释和固定后，滴于血细胞计数板上，在显微镜下计数红细胞计数区内的所有精子数并换算为每m1内所含精子数。此外还可用电子细胞计数仪经调整阈值设置后计数精子数量。

将已经液化的精液标本均匀混合，用白细胞计数吸管吸精液至0.5刻度，再吸稀释液至11刻度，振荡三分钟，然后置于血球计数板内，计数二大格（每格面积1平方毫米）之精子数，在尾数后加5个“0”即得每毫升精液内精子数。例如计数为1280个，则每毫升精子应为128,000,000。精液稀释液之配制：重碳酸钠5克、福尔马林1毫升、蒸馏水加至100毫升。稀释液内重碳酸钠有消化粘液的作用，福尔马林有使精子制动的作用。如精液之稠度过高而不易吸取时，可以精液1毫升混匀于稀释液19毫升内，稀释后进行计数。如精子的数目极少，亦可改为稀释10倍计数。每次排精75%的精子是从附睾尾部所贮存的，还有25%是由输精管道的其他部分来的，因此单凭一次排精的精子计数来衡量睾丸生精机能是不***的。只有在排精后间隔4-5天以后多次精液检查，才能比较正确地从这些精子计数来反映睾丸的生精机能。 精子分析，直线速率（VSL）‌：精子头在开始检测时的位置与终止所处位置之间的直线运动的时均速率。计算机辅助精子分析精确温度控制

Hamilton Thorne IVOS是一套整合了光学观察系统的精子动力分析仪。如今，IVOS 已成为快速、准确、稳定可靠的进行精子分析的代名词。仪器特点：新款内建CD Writer!内部整合光学系统自动化，内置样品台可用于多种样品分析 仪器操作简单提供满足需求的分析结果实时质量控制分析结果列表内部整合的光学系统IVOS是***一套内置光学系统的精子动力分析仪。与其它同类产品相比，IVOS并不采用显微镜持续照明方式，而是采用闪光拍摄方法。这种拍摄方法能够消除由于精子运动而造成的位置模糊。通过60祯/秒的拍摄速度，能够得到准确可靠的精子速度和运动参数分析结果。IVOS可在以下三种模式下分析精子样品：相差，明场和多波长荧光模式。自动化内置加热平台作为整合光学系统的一部分，由计算机控制的IVOS样品平台可在分析时提供准确的温度控制和位置定位。样品台的温度可在室温到40°C范围内调节，稳定度为0.5°C。分析区域的选择可选用自动或手动方式。样品台的温度和位置可实时显示在视频窗口中。IVOS 还允许用户自己进行分析室设定，控制分析样品量。北京计数精子分析DSL在精子研发的历程中，计算机辅助精子检测经历了黑白图像机、彩色图像检测。目前先进的是荧光精子图像检测。

CASA系统也可用于精子形态学评估。CASA系统可用来定量分析精子头部形态学、中段甚至主段的形态，可以把精子头部和中段分类为正常或者不正常，还可以给出头部和中段尺度、头部椭圆率和匀称性的均数、标准差和中位数，以及对染色的精子顶体区进行测量[3]。

与人工操作相比，自动化系统更具客观性，精确度和重复性的潜力[4]。精确度和重复性不低于7%[5]，这优于有经验的技术人员的手工评估。两个研究已经提示在CASA结果与生育力之间存在***联系。Coetzee等发现自动分析的正常精子形态的结果是预示体外受精率和妊娠率的有意义指标[6]。Garrett等发现**中能与透明带结合的、具有某些头部形态特征的精子所占的百分比（Z%），和直线速度（VSL）的精子的百分比，与大样本的低生育力夫妇的自然妊娠率是有***且**的关系。Z%和VSL与生育力间的关系显示是连续的，而且没有显示临界值；高于临界值，妊娠率也不会进一步增加[7]。

采集精液前5～7天内必须停止性生活，并且不得有**、梦遗等情况，还应禁烟戒酒，忌服对生精功能有影响的药物等。采取精液时间以晨起为佳，采精前用温水将双手、**，尤其是**洗净。可采用**法或电动按摩**法引起排精。精液的排出具有一定顺序，开头部分来自前列腺、附睾及壶腹，伴有大量精子，***部分来自精囊，故应收集整份精液，不要遗漏任何部分，尤其是开头部分。正因为易丢失精液的***部分,故不能用体外**法收集精液。盛精液的容器应干净、无菌、干燥，采精前容器的温度应与室温相同；瓶子不应过大，但瓶口不应过小，以免将精液射出瓶外；还应贴上标签，记录姓名及取精时间。在冷天应将精液标本保温，放置在贴身内衣袋中，不可倾斜或倒置，尽可能在1小时内送到实验室。WHO第6版明确提出：使用CASA系统须遵循适当的程序步骤，才能获得可靠和可重复的结果。

通过结果的生物学意义对结果质量进行评估‚当所有具生物学意义的参数在测试中表现出较小的可变性时则方法学可变性亦较低方法学可变性低则结果质量就高。CASA系统获得的数值与直观评估获得的数值进行分析和比较在精子数量和综合运动性上具有较好的相关性而·131·中国优生与遗传杂志2002第10卷第6期DOI:10．13404／j．cnki．cjbhh．2002．06．091在前向运动精子百分率上的相关性较低］。Holt等报道了在常规实验条件下采用五种不同的CASA系统对**参数值进行比较，其结果为：采用同一个测定池由不同的操作者测定**参数；变异系数（CV）是29％‚活动精子比率的CV为24％‚平均路径速度（VAP）的CV为43∙85％。作者们指出该分析结果不应看作是不同CASA系统间的工作情况的比较‚实际上它揭示了操作者的错误是差异的主要来源。目前有待于寻找进一步的标准来评估CASA变量的结果质量。精子***的生物学功能是使卵细胞授精‚因此用夫妇中的授精结果来考察精子运动性是合理的‚只有在该基础上能够确定活动性参数的重要性。辅助生殖技术（授精IVF）的发展使检测精子质量与各参数间的关系的比较成为可能；同样可以验证CASA测定结果与精子真实质量间的相关性有利于CASA结果质量的提高。CASA系统操作简便，检测速度快，且重复性优于人工检测。北京计数精子分析负相差

精子分析，平均角位移（MAD）‌：精子头沿其曲线轨迹瞬时转折角度的时均J对值‌。计算机辅助精子分析精确温度控制

美国Hamilton Thorne的TOX IVOS精子分析仪已经被FDA和国内外毒理学实验室所使用。本试验研究目的对精子分析仪和血细胞计数板在大鼠附睾精子计数结果的比较验证。方法选取三批次雄性SD大鼠60只,每批20只,对三批次雄鼠的精子计数进行比较。健康雄鼠通过戊巴比妥钠麻醉实施安乐死后,取左侧附睾尾称重,将附睾尾部放入37℃预热的含有M199培养液平皿中,剪碎附睾尾,放入培养箱中37℃孵育5 min,然后吸取1份精子悬液,用M199培养液进行一定倍数的稀释,混匀后,取1滴稀释液,滴入精子分析仪**载玻片上,将载玻片放入TOX IVOS精子分析仪载物台,进行精子计数,同时吸取稀释后的精子悬液滴入血细胞计数板内,通过光学显微镜进行计数,比较两种计数方法的差异性。结果***批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为70.2±33.2,61.0±27.1;第二批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为128.8±116.8,114.6±86.9;第三批次雄鼠精子分析仪和血细胞计数器的精子计数结果分别为165.9±91.7,140.0±59.6。三个批次的精子分析仪和血细胞计数板的精子计数结果无统计学差异(P>0.05)。结论精子分析仪是一种方便、可靠、快速、高效的研究工具,在生殖毒理学研究中具有重要的应用价值。计算机辅助精子分析精确温度控制