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使用RFect系列小核酸转染试剂做siRNA/miRNA转染测实验注意事项：1.细胞接种：一般做转染前现在接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%；如果细胞是原代细胞，接种密度可以密一些，细胞计数在2*10^6cell/ml；悬浮细胞可以在转染当天接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），待细胞状态稳定后做转染前细胞密度30-40%。2.为了能在使用时有较好的转染效果，靠前次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试剂即可。将较佳转染条件（siRNA与转染试剂的用量、比例）放大到对应的孔板即可。将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体完全融化。贵阳正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价

原代细胞传代培养方法：1.当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。2.提前准备好多聚赖氨酸（PLL，货号0403）或纤维粘连蛋白（BPF，货号8248）包被好的培养瓶。3.将完全培养基，胰酶/EDTA消化液（T/E，货号0103），胰胰中和液（TNS，货号0113）和不含钙镁离子的DPBS（货号0303）加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。4.用DPBS冲洗细胞。5.以T-75培养瓶为例，向培养瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。6.在消化期间，准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清（FBS，货号0500）。温州原代细胞分离试剂盒单价细胞培养过程中，多久更换一次培养基这取决于细胞生长的速度。

注意事项：所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。使用时一定要根据自己的实验需要购买提取试剂盒，如果不是试剂盒，或许能提出RNA，但不能确保其质量以及完整性，会影响RT-PCR、Northernblot、Dotblot、RealtimeRTPCR、芯片分析、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析、分子克隆等后续实验的结果。当前提取效果好的是RNA提取试剂盒，但其售价较高，单次实验费用花费太大，对精度要求不高的实验没有必要购买，当然还有其它的进口试剂盒，但是均存在价格高、订货周期长的问题（如果碰上国内无货的时候，要从国外发货，会等很长一段时间）。普通的提取实验用国产的试剂盒就足以，价格不高，基本上各地均有现货，如天根（国内生产的试剂盒中销售面比较广的一种）等，其价格比进口试剂盒要便宜许多，且效果还不错，性价比还可以

原代细胞培养：组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，较简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，常采用离心后的细胞分层液，因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。

原代细胞的小知识：冻存通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。与细胞系不同，原代细胞增殖有限，我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移，如果你正在使用一个增殖困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞（如成纤维细胞）可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。正常的原代细胞培养，在无污染的情况下，建议培养基中不加抗体，抗体会影响细胞的某些基因变异从而导致实验数据有差异，所以cellsystems的细胞在分离提取时就考虑到这点，他们不会采用任何抗体去分离和纯化的同时，通过酶消化或者离心洗涤的方法让细胞达到95%以上的纯度，这样得到的实验数据更为准确。必须保持细胞的悬浮状态。可以通过增加培养液的黏度来帮助细胞呈悬浮状态。济南正规原代细胞分离试剂盒直销价

当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞。贵阳正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价

原代细胞的基本结构及作用：1.细胞壁（CellWall）【动物细胞没有】位于植物细胞的外层,是一层透明的薄壁。它主要是由纤维素和果胶组成的，孔隙较大，物质分子可以自由透过。细胞壁对细胞起着支持和保护的作用。2.细胞膜（CellMembrane)细胞壁的内侧紧贴着一层极薄的膜，叫做细胞膜。这层由蛋白质分子和磷脂双层分子组成的薄膜，水和氧气等小分子物质能够自由通过，而某些离子和大分子物质则不能自由通过，因此，它除了起着保护细胞内部的作用以外，还具有控制物质进出细胞的作用：既不让有用物质任意地渗出细胞，也不让有害物质轻易地进入细胞贵阳正规原代细胞分离试剂盒厂家批发价