南京正规外泌体提取试剂
外泌体的提取方法学规范、统一定量及鉴定等。关于外泌体的提取有超速离心、试剂盒、超滤法、蔗糖密度梯度离心等,然而各种方法均有其利弊。超速离心法是目前外泌体相关文章中的主流方法,由于离心步骤繁琐,费事费力,而且步骤多导致实验中容易污染,且损耗量大,使得较终回收的外泌体不稳定。而且对于抽提细胞上清来说,更是极为不请便,试想用提取300ml的上清需要6个50ml离心管,无论是过滤还是后续的每一步的离心去沉淀,都具有操作极其不便的缺点,总之非常麻烦。而超滤法存在外泌体会堵塞膜孔,造成浓缩效率低,浓缩管重复利用差,甚至堵塞在膜孔的外泌体还可能会粘连成团,造成损失及较后的数据有误差,对于后续实验也有影响。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。南京正规外泌体提取试剂
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外泌体的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是效率低,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,不利于下游实验,难以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇(PEG)为常用的多聚物,可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集病毒,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多(假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等。
外泌体(exosome),特指直径在40-100nm的盘状囊泡。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。现已证实可以分泌外泌体的细胞有:肥大细胞、淋巴细胞、树突状细胞、瘤细胞、间充质干细胞等。外泌体在免疫中抗原呈递、瘤的生长与迁移、组织损伤的修复等生理病理上起着重要的作用。同时,不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,可作为疾病诊断的生物标志物。细胞外囊泡是蛋白质、mRNA、miRNA和脂质运输来完成细胞间通讯通路的重要媒介,根据它们的大小和发生分为三类,包括外泌体、微泡和凋亡小体。其中,外泌体是直径大约为40-100nm的包装囊泡,由多种细胞分泌,内含有特定的蛋白质、脂质、细胞因子或遗传物质。来源于不同的组织的外泌体不光具有其特异性蛋白分子,而且还包含其行使功能的关键分子外泌体是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为30~150nm的具有脂质双层膜的微小膜泡。
外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,可通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体,内涵体与细胞膜融合后释放其中的小囊泡。外泌体的直径在40-110nm之间,其中包含RNA、蛋白质、microRNA、DN**段等多种物质,存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中。外泌体从发现至今已有30多年的历史,虽然较初被认为可能是细胞的“垃圾”,所以才被排出来,但是近年来研究表明外泌体具有功能活性并可进行细胞间信息传递。如今,研究已经发现外泌体在抗原提呈细胞中呈递抗原程中、一些病症细胞发生的发展、神经细胞信号转导过程中都发挥着重要作用。专利申请利用分离培养人尿液来源细胞并收集培养基来进行体外培养。超离法是较常用的外泌体纯化手段,采用低速离心、高速离心交替进行,可分离到大小相近的囊泡颗粒。天津外泌体提取试剂平均价格
一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标。南京正规外泌体提取试剂
可以。为了能够高效提取细胞培养上清中的外泌体,磁珠可重复使用5次(同一样品)。试剂盒里的缓冲液含5次提取需要的量。1mL体积以上细胞上清样本建议进行浓缩后再回收,提取时可进行反复抽提,提高提取效率。用血液样品进行实验时,需要根据磁珠状况来判断是否能重复利用;若磁珠发生聚集,利用涡旋仪也无法使磁珠分散,不建议继续使用。详情参考操作说明书。太好了,这样实验成本瞬间就降下来了,那样品纯化所需的比较低量是?老师:使用旋转器的需要500μL以上,使用离心管混合器的需要100μL。样品量更少的情况下加TBS到所需比较低量后再使用ExosomeCapture固定化磁珠。同学:电镜分析需要外泌体的量是多少?南京正规外泌体提取试剂
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