上海10x单细胞测序服务

大量研究发现在同一或组织的相同类型细胞也表现出显着的异质性，每个细胞都有其独特的表达模式。例如实体瘤样本的总RNA，一半以上来源于非病细胞（成纤维细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等），使得病细胞的信号可能被隐藏。因此，采用均值对单个细胞进行表征是不合适的，可能会丢失许多关键信息。另一方面，传统高通量测序方法，难以应用在对自然界中难培养的微生物的研究、罕见循环瘤细胞细胞的转录组分析、胚胎发生很早期的分化特征研究、瘤细胞的非均质性和微进化研究等精确程度较高的研究领域。随着细胞分选和测序技术进步，单细胞测序技术应运而生。单细胞测序是指在单个细胞水平上，对基因组、转录组、表观组等遗传信息进行高通量测序分析的技术。上海10x单细胞测序服务

单细胞分离：有限稀释技术是利用移液管稀释分离细胞，这种方法的主要缺点是效率低下，成功率20%左右。显微操作法是一种经典的方法，用于从少量细胞样本中提取细胞，如早期胚胎或未培养的微生物，缺点是耗时和低通量的。流式细胞分选(FACS)较广用于分离单个细胞，在悬浮状态下需要较大的起始体积(>10,000个细胞)。激光捕获显微分离(LCM)是利用计算机辅助的激光系统将单个细胞从固体组织中分离出来。微孔microwell 优势是可以与荧光触发细胞分离技术(FACS)结合，实现基于表面标记的细胞选择。对于想要分离特定细胞群的研究很有效；另外一个优势就是，可以对细胞进行拍照，帮助确定孔中是否存在损伤的或者重复的细胞。缺点是通量低，对每个细胞进行操作需要很大的工作量。微流控相对微孔，它的通量更高。缺点是只有10%的细胞能被捕获到，加入处理的细胞类型比较稀少，那么能被芯片捕获的就更少了，通量不高，成本高。上海10x单细胞测序服务针对单个细胞研究时，首先将单个细胞进行分离，并确保其生物完整性不被破坏。

单细胞测序像快照，能够捕获不同发育时间下不同机体组织、不同类型的细胞，让研究的视角有更精细的分辨率。我们传统的测序方法，是在组织水平或者说多细胞水平上进行的，很终得到的遗传数据其实是从多个或者多类细胞中得到的平均值，但是却丢失了细胞异质性的信息。而单细胞测序，则能够在更精细的单个细胞水平上获得遗传信息，从而揭示每个细胞的基因结构和基因表达状态，反映混杂样品测序所无法得到的异质性信息和稀有细胞的遗传信息。随着技术的更新和突破，单细胞测序技术由早期的高成本、低通量、低精确度及低自动化发展到目前的低成本、高通量、高准确率、高自动化，效率和应用得到飞速提升，能够快速确定成千上万个细胞的精确基因表达模式，分析每个细胞的遗传异质性，从而在神经生物学、生长、病症生物学、临床诊断、免疫学、微生物学、胚胎学、产前基因诊断等多个领域发挥重要作用，使科研产出逐年递增，正在成为生命科学研究的焦点之一 。

单细胞测序：单细胞数据分析很有意义的一步某过于对亚群进行功能注释了，搞清楚每个亚群的具体功能，再结合亚群在不同分组样本中的变化（细胞比例或基因表达），就可以搞清楚疾病的发病机制（哪些细胞类型的改变以及哪些功能的改变导致疾病的发生），从而可以寻找潜在的疾病机制和靶点。分析样本整体上不同功能的变化，同时可以结合亚群的注释来分析哪些亚群影响了样本的这些功能的改变，起到了一个互相补充和相互验证的效果。分析亚群之间的分化关系以及分化过程能的变化，一方面可以分析亚群之间的演变关系，这也可以从另一个层面对亚群功能进行诠释。如果是同时做了TCR或BCR实验的，我们也可以结合mRNA测序分析不同样本和不同细胞类型TCR或BCR的克隆扩增情况。单细胞在许多领域都占有一席之地，对于早期的诊断、追踪以及个体化具有重要意义。

单细胞分析的一步是细胞捕获和分离，单细胞的获取，很初是通过梯度稀释的方法，既繁琐也容易污染；随后通过显微操作方法，用类似注射器的装置分离单细胞，或激光捕获显微切割技术（LCM），然而可操作性并不强；再往后，流式细胞仪的分拣成为很常用的单细胞分离方法，但对环境要求过高；近年来微流控技术的发明，逐步成为研究者们的选择,不但减少了昂贵试剂的使用量，节约了成本，还提高了操作效率和灵敏度。单细胞全基因组DNA测序是一项富有挑战性的工作，由于在单细胞中的DNA和RNA的数量非常小（一个典型的人类细胞含有约6.6pg DNA、10pg总RNA。）用传统的测序仪无法检测，所以科学家们必须首先对这些分子进行扩增，同时尽量的减少错误。单细胞测序技术是在单细胞水平对基因组进行扩增与测序的技术。单细胞测序技术被较广应用于基础科研和临床研究。上海10x单细胞测序服务

对于稀有样本的获取和难解离组织的细胞分离，也是目前单细胞测序技术仍然面临的挑战。上海10x单细胞测序服务

在单细胞转录组测序技术快速发展的同时，单细胞多组学技术也在迅猛发展。所谓单细胞多组学就是指在同一个细胞内同时检测两种或两种以上的组学，如单细胞转录组与单细胞ATAC联合检测，以及单细胞转录组、免疫组库、表面蛋白同时检测等。目前，单细胞多组学检测已包含转录组、基因组、表观组、免疫组、蛋白组等多个组学方面，为单细胞水平上的研究提供了更、更精细、更完整的分析策略。与其他传统测序技术相比，单细胞测序仍处于起步成长阶段，但它在科研以及转化中的应用已经非常较广。例如在中，单细胞测序技术已被较广应用于新病毒的人体易感性和染上性损伤研究，以及性和预防性抗体的筛选工作。随着单细胞技术的不断成熟优化以及分析软件的开发，相信单细胞技术未来会实现更加较广的应用。上海10x单细胞测序服务

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