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另外,酚红作为pH值的指示剂被加入到细胞培养基中。酚红在产物纯化过程中会造成干扰,并且具有一定的固醇类***样作用,如雌***样作用。当用于哺乳类动物细胞的培养,可能会发生一些固醇类反应。现在商业化细胞培养基中的酚红含量可根据需求调整。因生物反应器具有pH在线检测技术,生物反应器培养动物细胞时,酚红可完全去除。细胞保护剂是保护细胞免受渗透压变化、剪切力、氧化及气泡作用等引起的损伤的物质。在使用生物反应器培养动物细胞时,细胞易被机械搅拌和通气鼓泡产生的流体剪切力和气泡作用所伤害甚至破损死亡。为降低这种损伤,除优化生物反应器结构和生产工艺外,可在细胞培养液中添加一些保护剂。其主要是通过改变细胞培养基物性或是对细胞具有保护作用的物质,常用的种类有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非离子性表面活性剂PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.细胞培养基的理化性质动物细胞在细胞培养基中不仅能存活,还要分裂增殖,合适的渗透压、pH值等理化性质是细胞培养基必须具备的前提条件。动物细胞大多数需要轻微的碱性条件,适宜pH在~。细胞培养基的pH值通常需经校正的pH计来测定。在细胞生长过程中,随细胞数量的增多和代谢活动的加强。无酚红培养基在细胞实验中减少了不必要的干扰。江西DMEM/F12培养基生产企业
4、本发明植物**培养基,其不含碘化钾,在绝大多数植物中,碘元素不是必需元素,实验发现去除碘化钾对植物**培养没有影响,并且植物在脱离培养基进行后期培养时仍可以从土壤等基质中富集碘元素,去掉碘化钾成分,也简化了培养基配制过程。5、本发明植物**培养基,其用nafeedta取代na2·edta和feso4·7h2o,该替换减少的**根离子通过适当增加**铵成分来补充,该替换主要基于两个特征,一方面,nafeedta是可溶性螯合铁,更容易被植物吸收,有利于植物叶绿体发育,另一方面,发明人发现,na2·edta和feso4·7h2o水溶液ph偏酸是ms、b5和n6等众多植物**培养基原始ph偏低及ph波动大的主要原因,本发明培养基中使用nafeedta之后,经ph为,而植物**适宜生长的ph一般为,因此,使用nafeedta既促进了植物对铁离子的吸收,又有利于培养基ph的稳定。6、本发明植物**培养基,其配方降低了mnso4·h2o、znso4·7h2o、h3bo3、cocl2·6h2o、na2moo4·2h2o的用量,增加了cuso4·5h2o、烟酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇的用量,该改变特征在于,有效减少愈伤**玻璃化发生,减少酚类物质产生,提高愈伤**的出愈率,实验发现,优化后的培养基出愈时间提前,对多种植物的愈伤**诱导是有益的。江西DMEM/F12培养基生产企业DMEM培养基在实验室中广泛应用于细胞实验。
此法由巴斯德创立,用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种:一种为℃加热15秒,另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下,水煮沸后温度达100℃,煮沸5分钟后可杀死一般**繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠,可将其沸点提高至105℃,既可促进芽胞的杀灭,又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法,常用附诺(Amold)流通蒸气**器,利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒,10-30分钟后**繁殖体被杀死,但对芽孢作用不大。(4)间歇**法(fractionalsterilization)。采用间歇方式达到**目的。将**物品置于阿诺流通蒸气**器内,100℃加热15-30分钟,每日1次,连续3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱过夜,致残存的芽胞发育成繁殖体,次日再通过流通蒸气**器加热而被杀灭。如此反复,既可杀灭芽胞,又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度,则可将温度下降至75-80℃,每次加热时间延长到30-60分钟,常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的**属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气**器(autoclave),在蒸气不外溢的条件下,使锅内压力增高,随之蒸气温度也增高。通常在℃。
1/2cs生长培养基的培养结果为:马铃薯茎端在1/2cs生长培养基上的存活率为100%,培养16d的幼苗,表现为植株健壮、平均茎高、平均茎中粗为,叶色浓绿,根系发达、平均根数为8个。如图4所示。对比培养例4:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例4,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为:马铃薯茎端在1/2ms生长培养基上的存活率为100%,培养16d的幼苗,表现为植株健壮、平均茎高、平均茎中粗为,叶色浓绿,根系发达、平均根数为6个。如图4所示。培养实例4和对比培养例4的培养结果比较:马铃薯茎端在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的存活率均为100%;在相同条件下培养16d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,其茎高、茎中粗、根的数量均优于1/2ms生长培养基。如图4所示。培养实例5:哥伦比亚型拟南芥叶片及根愈伤**诱导(1)拟南芥叶片愈伤**诱导培养基:cs基本培养基+,用超纯水溶解,。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。(2)拟南芥根愈伤**诱导培养基:cs基本培养基+2,,用超纯水溶解,。cs基本培养基的成分及用量如表1所示。。无血清培养基确保了细胞的纯净生长环境。
3)培养方法:将配制的1/2cs生长培养基分装于长、宽、高9cm的耐高温培养盒中,用移液枪吸取带有无菌水的无菌种子,吹打在无菌滤纸上,用无菌尖头镊子将种子均匀点播在培养基上;于温度22-24℃、湿度50-70%、光照强度1500-2000lux、光照和黑暗交替(光照时间16h、黑暗时间8h)条件下培养。(4)1/2cs生长培养基的培养结果为:哥伦比亚型拟南芥种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养16d的幼苗,表现为植株健壮,莲座叶均已伸展,叶色浓绿,根系发达、平均主根长为。如图1所示。对比培养例1:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例1,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为:哥伦比亚型拟南芥种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100%,培养16d的幼苗,表现为植株健壮,莲座叶部分伸展,叶色浓绿,根系发达、平均主根长为。如图1所示。培养实例1和对比培养例1的培养结果比较:哥伦比亚型拟南芥在1/2cs生长培养基和1/2ms生长培养基上的萌发率均为100%;在相同条件下培养16d时,与1/2ms生长培养基相比,1/2cs生长培养基中的幼苗长势更佳,主要表现为莲座叶长势更好、根系更为发达。如图1所示。使用减血清培养基减少了实验中血清带来的变异性。湖南无血清培养基常见问题
无酚红培养基适用于对酚红敏感的细胞实验。江西DMEM/F12培养基生产企业
但酚红在无血清细胞培养基中可能带来胞内钠/钾失衡,影响细胞生长。碳酸氢钠在细胞培养基中主要是作为缓冲系统,此外还具有调节渗透压的作用。通常产品使用说明中的碳酸氢钠推荐量是一个标准、安全量,是在科学的基础上根据实践经验所得。但是由于不同的细胞系(株)不同,同一株细胞适应环境也可能不同(细胞耐受性不同等),且存在的地域性水质差异等,在实际生产过程中也可稍作改动,但使用者需做相应的检测(理化及细胞生产试验等)。HEPES是一种非离子缓冲液,在pH~,在高浓度时对一些细胞可能**。HEPES缓冲液可与低水平的碳酸钠(g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES引起的渗透压增加。其安全浓度范围是10~25mmol/L。**酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是在没有葡萄糖的条件下,细胞也可以代谢**酸钠。谷氨酰胺在溶液中很不稳定,4℃下放置1周可分解50%,使用中**好单独配制,置-20℃冰箱中保存,使用前加入细胞培养液中。江西DMEM/F12培养基生产企业
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