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PH计校正的标准缓冲液有几种?
ph计校正常用的三种标准溶液:pH分别为4.0、7.0和10.0一般4.0的可以用邻苯二甲酸氢钾体系配制,7.0的用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠体系配制,10.0的用碳酸钠-碳酸氢钠体系配制,可以根据需要的缓冲容量确定浓度。校正pH计所用工具和原料:标准缓冲液(应选择与供试液pH值接近的标准缓冲液),目前标准溶液有7种,在我国一般使用以下3种溶液:(pH值在25℃时)1)邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)pH4.003;0.05M2)混合磷酸盐(Na2HPO4):磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液pH6.864;0.025M3)硼砂(Na2B4O7·l0H2O)pH9.182;0.01M pH计校准的正确顺序是:先用pH7.0缓冲溶液校准,再用pH4.0或pH10.0缓冲溶液校准。安徽缓冲液进货价
1:50~l:800)后,按行进行包被、洗涤。按列分别加入用稀释液1:100稀释的强阳性、弱阳性、阴性参考血清及稀释液(作空白对照),保温,洗涤。加工作浓度酶标抗体,洗涤,加底物显色,加酸终止反应后读取A值。选择强阳性参考血清A值;为0.8左右,阴性参考血清A值<0.1的包被抗原稀释度为工作浓度。?方阵(棋盘)法选择包被抗体和酶标抗体的工作浓度将抗体用包被液稀释为10mg/L、lmg/L、/L三个浓度按行包被,每一个浓度包被三行(每行3孔),分别在每个浓度包被的***、二、三行中分别加入强阳性抗原,弱阳性抗原和阴性对照,将酶标抗抗体用稀释液稀释为1:l000、l:5000、l:10000三个浓度,分别加入每个浓度包被的***、二、三列中。加底物显色,加酸终止反应,分别读取A值。以强阳性抗原液A值在,阴性参考A值<**适条件。据此选择包被抗体和酶标抗体的**佳工作浓度。?二、ELISA**适工作浓度的选择及标准化操作1**适工作浓度的选择?1.1间接法测抗体?????酶标抗体工作浓度的选择:①用IgG进行包被,洗涤。②将酶标IgG用稀释液作一系列稀释后分别加入已包被的孔中,保温、洗涤。③加酸终止反应后,读取吸光度(A)。读取A值在1.0时的酶标抗体稀释度,作为酶标抗体的工作浓度。北京缓冲液常用知识生物缓冲液是一种能够保持pH值不受酸碱度影响的溶液。
从中选取包被抗体浓度和酶标抗体的稀释度。为了进一步节省试剂,可以此浓度为基点,缩小间距再进一步做棋盘滴定。?2测定方法的标准化?2.1加样?????ELISA中除了包被外,一般需进行96孔加样。定性测定中有时不强调加样量的准确性。例如规定为加样1滴,如不具备相当的条件,要尽量使用相同口径的滴管,保持准确的加样姿势,使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中,加样量应力求准确,**好采用量程准确的微量移液器。加样时应将液体加在孔底,不要加在孔壁上部,避免出现气泡。?2.2保温?????在ELISA中,一般在加标本和结合物后,反应的温度和时间应按规定的要求,保温容器**好是水浴箱,可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发,板上应加盖,或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。如用保温箱,空湿盒应预先放在其,以平衡温度。?2.3洗涤?????洗涤在ELISA过程中不是反应步骤,但却是决定实验成败的关键。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯一类物质即避免非特异性吸附,在ELISA中**为常用。ELISA板的洗涤一般可采用以下方法:吸干孑L内反应液;将洗涤液注满板孔;发表评论请自觉遵守互联网相关的政策法规,严禁发布***、**、反动的言论。
pH缓冲液的配制及其保存:1.pH标准物质应保存在干燥的地方,如混合磷酸盐pH标准物质在空气湿度较大时就会发生潮解,一旦出现潮解,pH标准物质即不可使用。2.配制pH标准溶液应使用二次蒸馏水或者是去离子水。如果是用于0.1级pH计测量,则可以用普通蒸馏水。3.配制pH标准溶液应使用较小的烧杯来稀释,以减少沾在烧杯壁上的pH标准液。存放pH标准物质的塑料袋或其它容器,除了应倒干净以外,还应用蒸馏水多次冲洗,然后将其倒入配制的pH标准溶液中,以保证配制的pH标准溶液准确无误。4.配制好的标准缓冲溶液一般可保存2—3个月,如发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时,不能继续使用。5.碱性标准溶液应装在聚yi烯瓶中密闭保存。防止二氧化碳进入标准溶液后形成碳酸,降低其pH值。PBS缓冲液中的磷酸盐和盐水可以维持实验体系的离子强度稳定。
实验室使用缓冲液时的pH计或酸度计调校方法:1、在对缓冲液使用pH计进行校正时,需要调整仪器的斜率,并将电极上部的橡胶塞拨开,将小孔暴露在外。否则,在校正过程中会产生负压,导致溶液无法正常进行离子交换,从而使测量数据不准确。2、将电极从烧杯中取出,用滤纸将未干的水分吸干,然后将其放入装有混合磷酸盆的烧杯中,等待大约15分钟,然后进行仪器的调整,设定基准点。3、然后将电极放入装有KHC8H4O4或硼砂溶液的容器中,等待15分钟后,观察仪器显示的pH数值。4、校正完成后,将橡胶塞放回原位。如果暂时不使用pH计,一定要保护好它,将其放入保护套中,以延长其寿命。此外,需要注意的是pH计属于易碎品,需要轻拿轻放。
手持式缓冲液pH计的校准方法:在温度为25度的条件下,将测试电极插入pH值为6.86的混合磷酸盐标准缓冲液中,并缓慢转动电极。可以稍微调整校正电位器,直到显示器上的数值与标准缓冲溶液的pH值相同。如果将电极插入其他缓冲溶液中,如pH值为4.01的C8H5KO4或pH为9.18的硼砂标准缓冲溶液中,显示的数值与缓冲液的pH值允许有一定误差,但误差应在参考值范围内。 为什么缓冲溶液可以维持PH值的稳定呢?北京缓冲液常用知识
PBS溶液一般指磷酸缓冲盐溶液,不可以喝。安徽缓冲液进货价
3.高温高压**后,4℃保存。SolutionI(质粒提取用)组份浓度:25mMTris-HCl(),10mMEDTA,50mMGlucose配制量:1L配制方法:1.量取下列溶液,置于1L烧杯中。2.高温高压**后,4℃保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。SolutionII(质粒提取用)组份浓度:200mMNaOH,1%(W/V)SDS配制量:500ml配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml烧杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加**水定容至500ml,充分混匀3.室温保存,此溶液保存时间比较好不要超过一个月注意:SDS易产生气泡,不要剧烈搅拌SolutionIII(质粒提取用)组份浓度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml配制方法:1.称量下列试剂,置于500ml烧杯中。2.加入300ml去离子水后搅拌溶解。3.加去离子水将溶液定容至500ml。4.高温高压**后,4℃保存。MEDTA()组份浓度:MEDTA配制量:1L配制方法:1.称取gNa2EDTA·2H2O,置于1L烧杯中。2.加入约800ml的去离子水,充分搅拌。3.用NaOH调节pH值至(约20gNaOH)。注意:pH值至,EDTA才能完全溶解。4.加去离子水将溶液定容至1L。5.适量分成小份后,高温高压**。6.室温保存。1MDTT组份浓度:1MDTT配制量:20ml配制方法:1.称取gDTT,加入到50ml塑料离心管内。2.加20ml的MNaOAc()。安徽缓冲液进货价
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