云南无血清培养基常用知识

    一）、实验室种子培养基**方法1、高压蒸汽**锅、手提式**锅。容量小。2、立式或卧式**锅。容量较大，一般能装几十瓶或几百瓶。3、**柜。要和蒸汽锅炉配套，用于大量种瓶培养基的**，一次能装几百至几千瓶(袋)。（二）、培养基的分批**1、定义：将配制好的培养基输入发酵罐中，用蒸汽加热，使培养基和设备同时**的一种**方式，又称实罐**。2、**过程过程包括升温、保温和冷却等三个阶段，各阶段对**的贡献：20%、75%、5%。培养基的升温可由两种方式实现：间接加热，在夹套或蛇管中通入蒸汽加热；直接加热，在培养基中直接通入热蒸汽加热。**过程中加热和保温阶段的**作用是主要的，而冷却阶段的**作用是次要的，一般很小，可以忽略不计。此外，还应指出的是，应当避免长时间的加热阶段，因为加热时间过长，不仅破坏营养物质，而且也有可能引起培养液中某些有害物质的生成，从而影响培养过程的顺利进行。在实际生产中，也可能遇到所供蒸汽不足、温度不够高的情况，这时可以适当延长**时间。生产上甚至有用100℃蒸煮而达到彻底**的实例。如要做固体曲而没有高温蒸汽时，可将原料用100蒸汽蒸30min，杀死其中的营养细胞，但孢子与**的芽孢没有被杀死。RPMI1640培养基提高了细胞的存活率和生长速率。云南无血清培养基常用知识

    一般情况下应调pH比所需值低～，因过滤**后，pH值会升高约。8）在细胞培养过程中，建议不加或加少量的***，如血清的浓度较低则所加***的量也要相应降低一些。9）建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH，因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。如下图所示：图6-1MEM培养基（SLM，MD611）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压图6-2199培养基（MD502）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压培养基**培养基的**方法主要有两种，高压**及um微孔滤膜过滤**。与过滤相比，高压**的工作强度小，相对便宜，失败率低，但易造成营养成分的流失。高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，可在高压**后加入。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。为保证高压**的效果，**设备的验证很关键，可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，因此不需将**时间延长。过滤**大多数培养基采用～μm孔径的微孔滤膜进行过滤**，并且已成为培养基**的发展方向。云南DMEM/F12培养基常见问题MEM培养基在药物筛选中有重要作用。

    C）大肠埃希菌＋＋－－产气肠杆菌－－＋＋志贺菌属－＋－－沙门菌属－＋－＋表硫化氢和尿素酶试验对肠杆菌属的鉴别试验伤寒沙门菌甲型副伤寒沙门菌变形杆菌志贺菌属大肠埃希菌克雷伯菌属硫化氢试验－/＋＋＋＋＋＋＋－－－尿素酶试验－－＋－－＋乳糖发酵试验－－－－＋＋在培养基中加入指示剂或某种化学物质**不需要的**生长，利于需要的**分离，这种培养基称为选择性培养基。常用的抑菌剂有胆盐、煌绿、玫瑰红钠、亚硒酸钠等。常用的指示荆有溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝等。美蓝是氧化还原指示剂。例如，在培养基内加入青霉素可**革兰阳性**，而利于革兰阴性**的生长；如果加入链霉素，则可获得与加青霉素相反的选择效果；加入制霉素可*****，有利于**的分离。又如亚**铋琼脂，既能**革兰阳性**生长，又能**许多革兰阴性**生长，但伤寒沙门菌却能在这个培养基上生长出具有棕色环的菌落。SS琼脂是临床**检验中一种常用的选择性培养基。大肠埃希菌在SS培养基上，因发酵乳糖而产酸，使指示剂中性红变深，并使胆盐沉淀，所以菌落红色而不透明。沙门菌分解含硫氨基酸而产生硫化氢，硫化氢与枸橼酸铁形成硫化铁，所以菌落中心呈黑色。痢疾志贺菌，既不发酵乳糖也不产生硫化氧。

    对于大多数哺乳类动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围内都适宜。在生产、配制细胞培养基的过程中，渗透压的测定较为重要，有助于防止在生产、配制过程中出现称量等方面的错误。反应器高密度培养动物细胞过程，在添加碳酸氢钠的过程中注意渗透压的监控，防止渗透压过高对细胞的损害。温度温度对细胞培养基有较大的影响，温度过高可引起营养成份的降解或破坏，细胞培养基的pH、离子强度和电解常数pKa也可能受到影响。如细胞培养液中的谷氨酰胺，在高温条件下降解的速度较快，如35℃贮存时，放置3天降解25%左右，在4℃贮存3周降解约20%。粘滞性及表面张力含血清细胞培养液的粘滞性主要是由血清引起的，在转瓶培养贴壁细胞时，培养液的粘滞性对细胞生长没有多大影响；但在生物反应器悬浮培养细胞时，细胞培养液的粘滞性则直接影响搅拌转速控制及搅拌剪切力对细胞造成的损伤程度。表面张力对细胞培养有较大的作用，尤其在利用生物反应器进行悬浮培养时，搅拌和通气都会引起泡沫的产生。对于含血清培养液，由于血清中多种蛋白的存在，搅拌时产生的气泡较多，气泡的上升运动对细胞的损伤程度还有争议，但气泡的破裂对细胞有明显的损伤作用。为降低这种损伤。MEM培养基在细胞实验中表现出高效的稳定性。

    二、基本原理麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被***用于培养酵母菌品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万：培养基性能测试实用指南SN/：培养基性能测试实用指南品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万Systec培养基制备器产品描述SystecMediaPrep培养基制备器可精确便捷地对微生物培养基进行快速制备和**。Systec培养基制备器，不同型号可用于制备10-120升的培养基*操作简单，安全可靠温度和压力严格控制锁定装载舱口和外部盖品牌：Systec型号：MediaPrep-120参考报价：面议转2433：实验室培养基制备质量保证通则：实验室培养基制备质量保证通则.pdf品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万培养基的制备及**1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2.掌握培养基的配置方法。3.掌握干热**和高压蒸汽**的操作方法。品牌：安捷伦型号：1260Lnifntiy参考报价：20万-50万培养基生产新理念：一键式制备德国systec发明一款专门用于培养基**制备的特殊**锅――培养基制备器。自动分装：培养基制备后通过硅胶管道连接分装系统进行全自动分装，整个分装系统由微电脑主机精确控制，并内置紫外灯**，保证分装真正无菌状态。RPMI1640培养基含有多种关键营养成分，支持细胞生长。四川无血清培养基

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    愈伤**诱导率为100％。如图6所示。对比培养例6：将cs基本培养基替换为ms基本培养基，其余完全同培养实例6，ms基本培养基的成分及用量如表1所示。ms诱导培养基的诱导结果为：本氏***叶片愈伤**诱导时，培养15-18d的叶片略微增厚，在叶片四周产生较少的淡绿色愈伤**，愈伤**诱导率为90％，在愈伤**团块上产生的嫩绿色不定芽数量较少；本氏***根愈伤**诱导时，培养9-11d在切口处产生大量淡黄色致密的愈伤**，愈伤**诱导率为100％。如图6所示。培养实例6和对比培养例6的诱导结果比较：用上述方法进行本氏***叶片愈伤**诱导时，cs诱导培养基愈伤**诱导率为100％，而ms诱导培养基的诱导率*为90％，在所述相同培养条件下，与ms诱导培养基相比，cs诱导培养基可更快诱导出大量致密的叶片愈伤**、产生更多的不定芽；用上述方法进行本氏***根愈伤**诱导时，cs诱导培养基与ms诱导培养基诱导出的根愈伤**形态相近，两种培养基的根愈伤**诱导率均为100％。如图6所示。培养实例7：水稻成熟胚愈伤**诱导(1)水稻种子消毒及筛选：a、选种：以籼稻缙恢10号为例，将水稻种子晾晒干燥后于4℃下长期保存，挑选籽粒饱满、大小基本一致的水稻种子，用剪刀从种子中部剪开，去除谷壳。云南无血清培养基常用知识