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Westem HRP基材。高背景分锁不足更改为不同的阻止解决方案。吸笔架不够湿组装前,先将吸墨纸架弄湿。阻塞解决方案可能有始终准备新鲜的0.5%脱脂/低脂干奶。降级的抗体浓度过高降低抗体的浓度。吸笔架朝上放置将印迹架朝上放在蛋白素框架中。在框架中洗涤不足进行至少4次每次30 mL的洗涤。添加清洗剂时,确保真空连续运行缓冲。整个系统电平不一致的信号确保系统在平坦的水平表面上。污点抗体不均匀补充封闭液和抗体稀释剂遍及整个表面0.1%Tween 20表面活性剂。吸墨纸架使用小量移液器(例如5毫升),慢慢散布整个印迹中的抗体。应用至少2.5 mL(用于MultBlot),5 mL(用于Mini blot)或10 mL(用于Midi印迹)抗体。抗体体积低没有抗体回收盘确保抗体中的孔,回收托盘algn嘉定区Merck电阻仪Merck仪器联系电话Merck样本制备仪上海授权代理商。
白的免疫检测:SNAP i.d.“ 2.0系统与SNAP 1.d.系统(首先代)与标准免疫检测一种。 SNAPi.d。 2.0蛋白质检测b。快照蛋白质检测。标准系统Midi印迹系统首先代,单孔免疫检测对照,茴香霉素处理和PDGF处理的3T3小鼠成纤维细胞裂解液(10-0.63 ug)被转移到Immobilon9-P膜上。印迹被阻止含0.5%的非脂肪干mik(NFDM),并在加筋的盐水中制备含0. 1%Tweene 20表面活性剂(TBST),并用主要抗B-Tubulin探测(MAB3408)和次级HRP偶联的山羊蚂蚁(AP1 24P)在上述条件。将印迹暴露于X射线胶片一分钟。图2. erbB2的免疫检测:SNAP i.d.9 2.0系统与SNAP i.d.系统(首先代)与标准免疫检测s。 S
关闭真空。同样,溶液将被吸收到印迹架中,并且表面可能看起来干燥。重要提示:孵育10分钟后,再抽真空。11.向下压框架并施加真空。等待5至8秒钟,直到框架完全空了。真空运行连续添加30 mL洗涤缓冲液(对于MultiBlot为15 mL)。重复洗涤步骤3次(共3次)4次洗涤)。12.关闭真空,然后从框架上取下吸墨架。从污点固定器中取出污点,并与适当的检测试剂。如果使用了MultiBlot孔空白,则卸下并清洗。 扩展一级抗体孵育:一小时至过夜1.执行《通用议定书》的步骤1至5。2.加入2.5 mL(对于MultiBlot),5 mL(对于Mini blot)或10 mL(对于Midi blot)1X一抗(浓缩液)通常在标准免疫检测过程中使用)。3.用盖子盖住吸墨纸固定架。如果需要的话,将其从底座益启生物是默克细胞计数器的代理商。
你带盖框架(1)迷你吸墨纸架(2)SNAP1.d.2.0迷你吸盘固定架(双包装)SNAP2FRMN021个迷你带盖框架(2)迷你吸墨纸架(4)SNAPLd.o2.0MidiBlot固定框架(单个包装)SNAP2FRMD011个带盖Midi框架(1)Midi吸墨纸架(2)SNAPl.d.2.0Midi印迹固定框架(双包装)SNAP2FRMD021个迷笛中框(2)Midi吸墨纸架(4)SNAPl.d.2.0MultiBlot固定器(包括2个孔空白)SNAP2BHMB05050SNAPi.d.2.0迷你吸管座SNAP2BHMN0100100SNAPL.d.e2.0Midi污点持有人SNAP2BHMD0100100SNAPi.d.o2.0抗体收集盒SNAPABTR20快照印迹辊SNAP2RL印迹益启生物提供专业的细胞计数器。徐汇区Merck细胞跨膜电阻仪Merck仪器参数
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NAP i.d. @ 2.0蛋白b。 SNAP i.d.e蛋白检测.. 标准检测系统迷你印迹系统首先代,单井免疫检测用A431 EGF刺激的细胞裂解液(20至0.08 ug)转移到Immobilong-P膜上。印迹是用TBST中制备的0.5%NFDM封闭,并进行探测具有主要抗erbB2(04-291)和次要HRP-共轭山羊抗小鼠(AP124P)在以下条件下如上所示。印迹暴露于X射线胶片5分钟。 图3. Tau-1蛋白的免疫检测:SNAP i.d.2.0系统(MultiBlot,Midi和Mini)与标准免疫检测b。 SNAPi.d.o 2.0C。 SNAP i.d.8 2.01.标准一种。 SNAP id.o 2.0 MutiBlot迷你印迹Midi污点免疫检测Azheimers bran 崇明区MerckSNAPi.d.2.0加速器Merck仪器参数
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