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在使用透射电子显微镜观察生物样品前样品必须被预先处理。随不同研究要求的需要科学家使用不同的处理方法。固定:为了尽量保存样本的原样使用戊二醛来硬化样本和使用锇酸来染色脂肪。冷固定:将样本放在液态的乙烷中速冻,这样水不会结晶,而形成非晶体的冰。这样保存的样品损坏比较小,但图像的对比度非常低。脱干:使用乙醇来取代水。垫入:样本被垫入后可以分割。分割:将样本使用金刚石刃切成薄片。染色:重的原子如铅或铀比轻的原子散射电子的能力高,因此可被用来提高对比度。电子显微镜电子源是一个释放自由电子的阴极,栅极,一个环状加速电子的阳极构成的。江西tabletop sem电子显微镜供应商
透射电镜高分辨率的图像要求样品尽量的薄,电子束的能量尽量的高。因此可以认为电子不会被样品吸收,样品也就无法改变电子波的振幅。由于在这种情况下样品但但对波的相位造成影响,这样的样品被称作纯相位物体。纯相位物体对波相位的影响远远超过对波振幅的影响,因此需要复杂的分析来得到观察到的图像强度。例如,为了增加图像的对比度,TEM需要稍稍离开聚焦位置一点。这是由于如果样品不是一个相位物体,和TEM的对比度传输函数卷积以后将会降低图像的对比度。江西tabletop sem电子显微镜供应商电子显微镜可以分析从细菌到病毒多尺度的生物结构、形态、构成成分等特点。
透射电镜TEM中的对比度信息与操作的模式关系很大。复杂的成像技术通过改变透镜的强度或取消一个透镜等等构成了许多的操作模式。这些模式可以用于获得研究人员所关注的特别信息。TEM较常见的操作模式是亮场成像模式。在这一模式中,经典的对比度信息根据样品对电子束的吸收所获得。样品中较厚的区域或者含有原子数较多的区域对电子吸收较多,于是在图像上显得比较暗,而对电子吸收较小的区域看起来就比较亮,这也是亮场这一术语的来历。图像可以认为是样品沿光轴方向上的二维投影,而且可以使用比尔定律来近似。对亮场模式的更复杂的分析需要考虑到电子波穿过样品时的相位信息。
扫面电镜成像,主要是根据接受器接受电子撞击物体产生的二次电子信号,然后通过特定算法算出来的,其算出来的图像。下面贴一张电子发射头和周围两个接收的图片:由于二次电子的产生量,跟样品表面的起伏度有关,所以二次电子的立体感比较好。与此类似的还有散射电子信号,散射电子的产生量,跟样品原子序数有关,所以根据检测散射电子信号算出来的图像其材料对比度更见清晰,能看出来观测物体由几种元素组成。这些都是能形成我们能直观看到的图像的。扫描电子显微镜和其他分析仪器相结合,可以做到观察微观形貌的同时进行物质微区成分分析。
扫描电镜样品用戊二醛和饿酸等固定,经脱水和临界点干燥后,再于样品表面喷镀薄层金膜,以增加二波电子数。扫描电镜能观察较大的组织表面结构,由于它的景深长,1mm左右的凹凸不平面能清所成像,故放样品图像富有立体感。扫描电子显微镜的设计思想和工作原理,早在1935年便已被提出来了。1942年,英国首先制成一台实验室用的扫描电镜,但由于成像的分辨率很差,照相时间太长,所以实用价值不大。经过各国科学工作者的努力,尤其是随着电子工业技术水平的不断发展,到1956年开始生产商品扫描电镜。近数十年来,扫描电镜已普遍地应用在生物学、医学、冶金学等学科的领域中,促进了各有关学科的发展。由于电子显微镜电子需要穿过样本,因此样本必须非常薄。江西tabletop sem电子显微镜供应商
电子显微镜电子源能发射并形成速度均匀的电子束,所以加速电压的稳定度要求不低于万分之一。江西tabletop sem电子显微镜供应商
分辨率与透过样品的电子束入射锥角和波长有关。可见光的波长约为300~700纳米,而电子束的波长与加速电压有关。依据波粒二象性原理,高速的电子的波长比可见光的波长短,而显微镜的分辨率受其使用的波长的限制,因此电子显微镜的分辨率(0.2纳米)远高于光学显微镜的分辨率(200纳米)。当加速电压为50~100千伏时,电子束波长约为0.0053~0.0037纳米。由于电子束的波长远远小于可见光的波长,所以即使电子束的锥角但为光学显微镜的1%,电子显微镜的分辨本领仍远远优于光学显微镜。光学显微镜的较大放大倍率约为2000倍,而现代电子显微镜较大放大倍率超过300万倍,所以通过电子显微镜就能直接观察到某些重金属的原子和晶体中排列整齐的原子点阵。江西tabletop sem电子显微镜供应商
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