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扫描电子显微镜(英语:ScanningElectronMicroscope,缩写为SEM),简称扫描电镜,是一种电子显微镜,其通过用聚焦电子束扫描样品的表面来产生样品表面的图像。显微镜电子束通常以光栅扫描图案扫描。电子与样品中的原子相互作用,产生包含关于样品的表面测绘学形貌和组成的信息的各种信号,信号与光束的位置组合而产生图像。扫描电子显微镜可以实现的分辨率优于1纳米。样品可以在高真空,低真空,湿条件(用环境扫描电子显微镜)以及宽范围的低温或高温下观察到。扫描电镜视频放大器放大的二次电子信号是一个交流信号。江苏靠谱的扫描电镜哪家效果好
生物样品扫描电镜常规扫描电镜对样品要求:必须是干燥的,不含水分或挥发性物质;具有一定机械强度,能耐受电子束轰击;具有导电性,被激发时能够产生足够的二次电子。生物材料特点:含水分多,质地柔软,机械强度小;组成元素的原子序数低,导电性差,激发后二次电子的产额较少。制样的任务:通过一系列处理,既要尽量地保存材料的固有形态,又要改良其物理性能,使其适合在电镜下观察成像。 电镜是进行材料表征时用到一种重要工具,帮助观察材料的微观形貌。然而,在观察软/湿生物材料时(离体组织,带细胞材料等),涉及到观察样品的固定、脱水、干燥、金属溅射等步骤,处理复杂,耗时较长。广西生物扫描电镜哪家靠谱扫描电镜能同时分析形貌和成分,可用于形貌观察、显微结构分析、微区成分分析、断口形貌和成分分布分析等。
扫描电镜操作基本步骤 1 、取材 扫描电镜下观察的样品尺寸要求比较宽松,一般1cm3左右样品都能适合大多数扫描电镜观察。 2 、固定 铺片培养的细胞取出浸入 PBS 中,漂洗细胞表面。然后将细胞铺片放入青霉素小瓶中,加 4 ℃ 预冷的 3% 戊二醛,在 4 ℃ 固定 2h 或过夜,吸出固定剂,用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min ,再用 4 ℃ 预冷的 1% 锇酸。在 4 ℃ 固定 1h ,然后用 PBS 浸洗 2 次,每次 10min 。 3 、脱水 acetone / 醋酸异戊酯( 1 : 1 )脱水 10min ,接下来醋酸异戊酯脱水 30min ,或用系列梯度酒精( 30% 、 50% 、 70% 、 80% 、 90% 、 95% 、 100% )脱水,每种浓度酒精通过 2 次,每次 15min 。
较为常见的扫描电子显微镜模式是检测由电子束激发的原子发射的二次电子(secondary electron)。可以检测的二次电子的数量,取决于样品测绘学形貌,以及取决于其他因素。通过扫描样品并使用特殊检测器收集被发射的二次电子,创建了显示表面的形貌的图像。它还可能产生样品表面的高分辨率图像,且图像呈三维,鉴定样品的表面结构。扫描电子显微镜由三大部分组成:真空系统,电子束系统以及成像系统。真空系统主要包括真空泵和真空柱两部分。真空柱是一个密封的柱形容器。扫描电镜生物样品:蛋白、细胞及DNA等样品,请提供详细的制样过程,减少盐对测试结果的影响。
扫描电镜观察生物试样。因电子照射而发生试样的损伤和污染程度很小。同其他方式的电子显微镜比较,因为观察时所用的电子探针电流小(一般约为10- 10~10- 12A)电子探针的束斑尺寸小(通常是5 nm到几十纳米),电子探针的能量也比较小(加速电压可以小到2 kV),而且不是固定一点照射试样,而是以光栅状扫描方式照射试样,因此,由于电子照射而发生试样的损伤和污染程度很小,这一点对观察一些生物试样特别重要。扫描式电子显微镜(SEM)中的电子束尽量聚焦在样本的一小块地方,然后一行一行地扫描样本。入射的电子导致样本表面散发出电子,显微镜观察的是这些每个点散射出来的电子。由于这样的显微镜中电子不必透射样本,因此其电子加速的电压不必非常高。场发射扫描电子显微镜是一种比较简单的电子显微镜,它观察样本上因强电场导致的场发射所散发出来的电子。扫描电镜是一种多功能的仪器、具有很多优越的性能、是用途较为广的一种仪器。内蒙古哪家做扫描电镜拍照
扫描电镜观察厚试样:其在观察厚试样时,能得到高的分辨率和比较真实的形貌。江苏靠谱的扫描电镜哪家效果好
扫描电镜样本处理:新鲜取材后用2.5%戊二醛固定液固定样本,4℃过夜放置,倒掉2.5%戊二醛固定液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用1%的锇酸溶液固定样品1-2h;小心取出锇酸废液,用0.1M,pH7.0的磷酸缓冲液漂洗样品三次,每次15min;用梯度浓度(包括30%,50%,70%,80%,90%和95%五种浓度)的乙醇溶液对样品进行脱水处理,每种浓度处理15min,再用100%的乙醇处理两次,每次20 min。用乙醇与醋酸异戊酯的混合液(V/V=1/1)处理样品30min,再用纯醋酸异戊酯处理样品1h或放置过夜。临界点干燥。镀膜,观察。处理好的样品在扫描电镜中观察。江苏靠谱的扫描电镜哪家效果好
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