深圳育种脱靶检测实验室

Guide-seq原理图，Discover-seq细胞内的脱靶切割一般无法直接捕获，除了Guide-seq这种连接dsODN来间接记录脱靶位点的方法外，研究者们还想出一种蛋白介导的方法Discover-seq。由于DNA双链断裂后细胞会启动DNA修复机制，大量蛋白参与到断裂处的修复，所以研究者就对相关蛋白进行筛选，找到其中MRE11结合DNA的位点与DNA双链断裂的相关性比较好。DISCOVER-seq便是通过MRE11的CHIP-seq（染色质免疫共沉淀）来反映CRISPR的脱靶位点。。。。如何降低脱靶效应？选择特异的gRNA； 使用RNP； 使用eSpCas9的质粒； 使用Nickase Cas9。深圳育种脱靶检测实验室

对基于慢病毒/逆转录病毒载体的基因zhiliao产品，如出现与可复制xingbing毒可能相关的不良事件，还应开展可复制xingbing毒（replicablecompetentlentivirus/retrovirus，RCL/RCR）的检测。关于基因编辑产品的特殊考虑基因编辑产品除了适用基因zhiliao产品的一般考虑以及整合性载体的特殊考虑外，长期随访中还应额外关注脱靶风险，量化评估脱靶活性和在靶活性之间的相关性，或利用在靶活性来预测脱靶活性的水平。如果基因zhiliao产品通过全身给yaofang式递送，长期随访中的安全性监测不仅包括靶qiguan或靶组织的脱靶活性，而且还应包括可能发生在其他组织和qiguan中的脱靶活性。北京脱靶检测方法脱靶检测服务，推荐唯可生物，实验实力强，专业性高，检测效率高，结果准确率高。

CIRCLE-seq原理。细胞内检测方法由于提纯的基因组已经消化去除了组蛋白，结构较细胞内的染色质更为松散，理论上容易找到更多的脱靶位点。为捕获CRISPR在细胞内工作时真实发生的脱靶切割，研究者们也设计了一些细胞内的脱靶位点检测方法。1) Guide-seqCRISPR造成DNA双链断裂后，由于DNA修复机制的存在，断裂处很快就会重新连接，这时候提纯基因组DNA很难保留CRISPR造成的DNA断裂位点。所以为了记录细胞内真实的CRISPR脱靶切割，研究者们设计了Guide-seq[10]，利用NHEJ的DNA修复机制，将一段双链短核苷酸序列（dsODN）连接到CRISPR造成的DNA双链断裂处，相当于连接了一轮接头，然后再正常打断基因组，在另一侧连接第二轮接头。通过这种方式构建的文库，就可以获取脱靶位点一侧的序列。虽然每次CRIPSR导致的DNA双链断裂并不一定都会连接dsODN，但反过来说，越容易连接dsODN的位点，其发生脱靶切割的概率越高。通过Guide-seq找到的脱靶位点偏少，但一般都是可信度较高的脱靶位点，Guide-seq也是目前比较公认的一种脱靶检测方法。

BLESS：利用生物素标签对DSBs进行原位标记，后经PCR扩增实现对于生物素标记片段的富集，并通过二代测序实现脱靶位点检测。直接检测细胞中的切割位点，灵敏度与细胞、组织密切相关。LAM-HTGTS，片段化的gDNA经过LAM-PCR引入接头，然后进行全基因组易位测序。高通量的全基因组范围检测，可准确检测DSBs引发的重排。GUIDE-Seq，将dsODN    s标签整合到DSBs位点，通过二代测序检测这些标签所在的基因组区域，从而确定脱靶突变的位置。广使用的细胞内检测方法。能检测低频脱靶突变。Digenome-Seq，片段化的gDNA与CRISPR/RNP混合孵育，进行全基因组测序检测脱靶。全基因组测序，直接检测切割位点，能检测低频脱靶突变。脱靶检测评估，推荐唯可生物，实验实力强，专业性高，检测效率高，结果准确率高。

CIRCLE-Seq，将gDNA打断并环化，环化的DNA与CRISPR/RNP孵育，NGS测序检测线性化的DNapian段，确定脱靶位点。PCR富集后测序，成本相对较低，能检测低频脱靶突变。安必奇sgRNA脱靶效应评估，安必奇生物提供sgRNA脱靶效应评估服务，帮助您挑选高度特异，脱靶率低的sgRNA进行后续实验。同时，我们也协助您检测分析基因编辑后细胞样品的脱靶情况，通过各种高通量测序检测技术，我们能准确的分析全基因组范围内的脱靶位点，推动CRISPR/Cas9技术在zhiliao药物开发和临床研究中的应用。我们的优势：灵敏度高：能检测低频脱靶突变★准确性高：检测结果可通过实验验证★多种检测方法可选择以满足不同的实验需求检测脱靶效应比较好的方法:CIRCLE-seq。深圳脱靶检测评估

内基因编辑技术可能造成的脱靶效应,建立了一种被命名为GOTI。深圳育种脱靶检测实验室

通常不需要进行标准的遗传毒性组合试验，但应根据基因zhiliao产品的特点、产品的具体适应症、载体的已有信息、导入基因序列结构等，评估基因zhiliao产品整合进基因组的可能性，判断是否需要开展另外的遗传毒性研究，如研究基因组修饰的发生情况，并检测随后可能发生的异常细胞行为；评估插入突变（插入位点、插入拷贝数等）引起的遗传毒性风险。当基因zhiliao产品采用基因编辑或转座子技术时，需要关注脱靶编辑、转座子转座印迹引起的遗传毒性问题；鉴定/表征基因组整合位点。深圳育种脱靶检测实验室