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高效液相色谱分离原理

液—固

流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S)，可表示如下：Xm nSa ====== Xa nSm

式中：Xm--流动相中的溶质分子；Sa--固定相中的溶剂分子；Xa--固定相中的溶质分子；Sm--流动相中的溶剂分子。

当吸附竞争反应达平衡时：

K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]

式中：K为吸附平衡常数。[讨论：K越大，保留值越大。]

液相色谱类型

液相色谱按其分离机理，可分为四种类型--吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱、凝胶色谱法

吸附色谱法

吸附色谱法的固定相为吸附剂，色谱的分离过程是在吸附剂表面进行的，不进入固定相的内部。与气相色谱不同，流动相(即溶剂)分子也与吸附剂表面发生吸附作用。在吸附剂表面，样品分子与流动相分子进行吸附竞争，因此流动相的选择对分离效果有很大的影响，一般可采用梯度淋洗法来提高色谱分离效率。

在聚合物的分析中，吸附色谱一般用来分离添加剂，如偶氮染料、抗氧化剂、表面活性剂等，也可用于石油烃类的组成分析。

高效液相色谱

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“**离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。

高效液相色谱法之实例：

高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量**于400以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的75%～80%）原则上都可以应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在目前已知的化合物中，能用气相色谱分析的大约占20%，而能用液相色谱分析的大约占70～80%。

1、环境中有机氯农药残留量分析；

2、稠环芳烃的分析；

3．阴离子分析。 该系统良好的稳定性和重复性为数据质量提供了可靠保障，确保能够分析大量的样品，以供质控分析比较。

高效液相色谱法介绍

基本原理

高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography，HPLC)，是在经典液相色谱法的基础上，于20世纪60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀。因为较小的填充颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，***通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法，***地应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

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高效液相色谱相关术语

色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：

前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。前者少见。

峰底—基线上峰的起点至终点的距离。

峰高(peak height，h)—峰的比较高点至峰底的距离。

峰宽（peak width，W)—峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ

半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)—峰高一半处的峰宽。Wh/2=2.355σ

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