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并发现吸收光谱相似的有机物质,它们的结构也相似。并且,可以解释用化学方法所不能说明的分子结构问题,初步建立了紫外可见分光光度计的理论基础,以此推动了紫外可见分光光度计的发展。1918年美国国家标准局研制成了世界上diyi台紫外可见分光光度计(不是商品仪器,很不成熟)。此后,紫外可见分光光度计很快在各个领域的分析工作中得到了应用。朗伯早在1760年就发现物质对光的吸收与物质的厚度成正比,后被人们称之为朗伯定律;比耳在1852年又发现物质对光的吸收与物质浓度成正比,后被人们称之为比耳定律。在应用中,人们把朗伯定律和比耳定律联合起来,又称之为朗伯-比耳定律。随后,人们开始重视研究物质对光的吸收,并试图在物质的定性、定量分析方面予以使用。因此,许多科学家开始研究以比耳定律为理论基础的仪器装置。经过一个漫长的时期后,美国Beckman公司于1945年,推出世界上diyi台成熟的紫外可见分光光度计商品仪器。从此,紫外可见分光光度计的应用开始得到飞速发展。紫外可见分光光度计的展望紫外可见分光光度计虽然是一类有着很长历史的分析仪器,但每一次吸收了新的技术成果都使它焕发出新的活力。紫外可见火焰光度计开机前要先预热。云南光度计火焰光度计使用
罗丹明B的标准溶液的荧光光谱如图4所示。短波长侧的荧光被再次吸收,导致标准溶液的浓度变高的同时峰顶向长波长侧变化。根据577nm的荧光强度值创建的标准曲线如图5以及图6所示。如图5所示,在ug/ml(Abs)或更高的高浓度区域,标准曲线是弯曲的,但在图6的低浓度区域,可获得线性度良好的标准曲线。3比较结果、定量下限值来比较灵敏度与应用报告,使用标准曲线和10次空白测定中计算得的标准偏差σ,计算出了定量下限值(10σ)和检测下限值(3σ)。另外,采用了线性度较高的标准曲线。UV-2600i和RF-6000的定量下限值和检测下限值如表3所示。从通过本实验算出的定量下限值的比可知,RF-6000的灵敏度较高,是UV-2600i的400倍以上。即使对图3和图6的低浓度区域的标准曲线进行比较,图6(RF-6000)的结果中得到了离散较小的标准曲线。与对未被样品吸收的照射光进行检测的吸光光度法不同,荧光光度法以零为标准检测荧光,因此噪声水平低,可得到较高的灵敏度。UV-2600i和RF-6000的标准曲线的相关系数的平方值与浓度范围的关系如表4所示。另外,使用UV-2600i时,低于空白以外的定量下限值的点除外。即使在未达到UV-2600i的定量下限值的区域(0~)。山东实验室火焰光度计用途火焰光度计根据其特征光谱及光波强度判断元素类别及其含量。
紫外可见分光光度计有着较长的历史,其主要理论框架早已建立,制作技术相对成熟。目前,紫外可见分光光度计在追求准确、快速、可靠的同时,小型化、智能化、在线化、网络化成为了现代紫外可见分光光度计新的增长点。紫外可见分光光度计的发展历史分光光度法始于牛顿。早在1665年牛顿做了一个实验:他让太阳光透过暗室窗上的小圆孔,在室内形成很细的太阳光束,该光束经棱镜色散后,在墙壁上呈现红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫的色带。这色带就称为“光谱”。1815年夫琅和费仔细观察了太阳光谱,发现太阳光谱中有600多条暗线,并且对主要的8条暗线标以A、B、C、D…H的符号。这就是人们Z早知道的吸收光谱线,被称为“夫琅和费线”。但当时对这些线还不能作出正确的解释。1859年本生和基尔霍夫发现由食盐发出的黄色谱线的波长和“夫琅和费线”中的D线波长完全一致,才知一种物质所发射的光波长(或频率),与它所能吸收的波长(或频率)是一致的。1862年密勒应用石英摄谱仪测定了一百多种物质的紫外吸收光谱。他把光谱图表从可见区扩展到了紫外区,并指出:吸收光谱不只与组成物质的基团质有关。接着,哈托莱和贝利等人,又研究了各种溶液对不同波段的截止波长。
在仪器改变测试波长和测试一段时间后可通过按0%键和100%/0A键对仪器进行调零和调满度、吸光度。(5)显示方式的选择【相关实验】邻二氮菲吸光光度法测定铁的含量报告实验目的邻二氮菲吸光光度法测定铁的含量;熟悉722N型分光光度计的原理和操作。实验原理邻二氮菲吸光光度法是测定铁含量的常用方法。在PH为2~9的溶液中,Fe2+的显色剂邻二氮菲形成稳定的橘红色络合物,该络合物在508nm波长处有**大吸收。为了消除Fe2+的副反应及其他因素的影响,在微酸溶液进行,且用盐酸羟胺将Fe3+还原为Fe2+。吸光光度法定量分析的依据是朗伯比尔定律A=Ɛbc,当液层厚度b一定时A=Kc,吸光光度法定量分析的方法有直接比较法和标准曲线法,这个实验用标准曲线法。在标准曲线上查出试液中铁的含量,按下式求出原始待测溶液中铁的含量(ρ表示溶液中铁的含量,mg/L)ρFe,原始待测溶液=ρFe,标准曲线查得50/10实验步骤1、取出容量瓶和移液管,用蒸馏水清洗容量瓶并用相应的溶液润洗移液管;2、在6个容量瓶中用刻度移液管分别加入,、、、、、,5mLHAc-NaAc缓冲溶液,1mL10%盐酸羟胺溶液及,用水定容。将其分别对应编号为1、2、3、4、5、6号。火焰光度计的雾化效率越高,相应灵敏度越高,精密度越好,化学干扰越小。
分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性,研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器,可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长,通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。紫外-可见火焰光度计可用于大部分有色物质的定量监测,通常需要使用各种各样的显色剂。上海f-100火焰光度计使用
紫外火焰光度计的光谱是带状光谱。云南光度计火焰光度计使用
它还通过测定紫外光谱范围内强度峰值位置的精确度来确定波长的系统及随机误差。遵照这些建议来维护分光光度计,那么在今后的使用过程中再也不用担心测量结果有问题啦。杂散光是由于光学元件制造误差以及光学和机械零件表面的漫反射形成的。杂散光是分析样品的非吸收光,随着样品浓度的增加,杂散光的影响也随之增大,将给分析结果带来一定的误差。在紫外的短波区域光源强度和检测器的灵敏度均明显减弱,杂散光的影响更不能忽视。。云南光度计火焰光度计使用
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