软骨染色液(阿利新蓝法

稳定转染细胞的筛选：1、转染48 h后，用含适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。注意：细胞处于活跃分裂状态时的杀伤效果较好。但细胞过于稠密，其效率会降低，较好将细胞稀释至丰度低于25%。2、每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。3、筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间（取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果）。4、挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。5、后续更换正常培养基培养即可。BMC原代分离步骤：较上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)

丁胺卡那霉素功能与主治：①本品适用于绿脓杆菌及其他假单胞菌属、大肠杆菌、变形杆菌（吲哚阳性和吲哚阴性）、普鲁威登菌、克雷伯菌、肠杆菌、沙雷菌属、不动杆菌属与葡萄球菌属等所致的菌血症、细菌性心内膜炎、败血症（包括新生儿脓毒症）、呼吸道传染、骨关节传染、神经系统传染（包括脑膜炎）、皮肤软组织传染、胆道传染、腹腔传染（包括腹膜炎）、烧伤、手术后传染（包括血管外科手术后传染）及复发性尿路传染等。②阿米卡星不宜用于单纯性尿路传染初治病例，除非致病菌对其他毒性较低的克菌药均不敏感。③阿米卡星对大部分氨基糖苷类纯化酶稳定，故适用于治好革兰阴性杆菌中卡那霉素、庆大霉素或妥布霉素耐药菌株，尤其如普鲁威登菌属、粘质沙雷菌和绿脓杆菌所致传染。软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)科研实验中试剂取用应注意事项：应在容器的正上方垂直滴入；胶头滴管不要接触容器壁。

BMC原代分离步骤：1) 抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液，加入PBS按1：1稀释血液（一般**管2mL+2mL）。2) 取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。3) 吸取稀释血液，在离分层液上方1cm处，沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于分层液上，并与分离液形成明显界面。4) 室温，离心2000rpm，20min。此时离心管中形成5层：较上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。5) 小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层，尽量全部吸出单个核细胞。加5倍以上体积的PBS洗2次，每次离心1500rpm，10min。

亚甲基蓝染色液(1%)使用说明 货号：G1303 规格：100ml 保存：室温，避光，12 个月。 产品说明： 亚甲基蓝(Methylene blue)又称美蓝、次甲基蓝、次甲蓝等，是一种芳香杂环化合物。含水 亚甲基蓝的分子式为 C16H24ClN3O3S，分子量为 373.9，CAS 号为 7220-79-3。亚甲基蓝染色 液常用于丝绸、纸张、细菌、细胞等染色。因其容易氧化，染色结果不宜长久保存。 操作说明：（光供参考） 1、 样品处理 （1） （2） （3） 对于石蜡切片：常规脱蜡复水。 对于冰冻切片：蒸馏水 2min。 对于培养细胞：先用 4%多聚甲醛固定，然后蒸馏水洗涤 2min，较后 换用新鲜的蒸馏水，再洗涤 2min。 2、 美蓝染色 （1） （2） 染色结果： Methylene blue Stain(1%)染色。 用蒸馏水或自来水充分洗涤，进行观察和拍照。 组织或细胞 蓝色 注意事项： 1、 开始次使用本试剂时建议先取 1～2 个样品做预实验。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。

潮霉素 B使用方法：一、 储存液的配制（50mg/ml）称取1 g 潮霉素B（CH6362）用PBS（0.01 M）溶液或去离子水溶解，定容20ml。0.22μm滤器过滤除菌，分装于无菌冻存管，2-8℃冷藏，1年内稳定。或直接选购潮霉素B溶液（50mg/ml，CH6361）二、 工作浓度的筛选：潮霉素B用来筛选的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于开始次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定较佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；细菌/植物细胞20-200μg/mL；菌类300-1000μg/mL。BMC原代分离步骤：取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)

pH缓冲溶液有何用途：检查仪器显示值和标准溶液的pH值是否一致。软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)

杀灭曲线的建立：通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线），确定能够杀死未转染宿主细胞的较低浓度，从而筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株。建立杀灭曲线至少选择5个浓度。1、按照20-25%的细胞密度将未转化的细胞铺在合适的培养板上，37℃，CO2过夜培养（需要更高密度，可增加接种量）。2、根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。3、第2天换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基，每个浓度做三个平行孔。4、接下来每3-4天更换新的含药物培养基。5、按照每2天进行活细胞计数，来确定杀灭未转染细胞的恰当浓度。通常7-10天内能够杀死绝大多数细胞的较低浓度为筛选用的工作浓度。软骨染色液(阿利新蓝法,pH2.5)