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鼠尾胶原实验应用:鼠尾胶原为底物的人鼻腔纤毛上皮细胞培养模式的建立目的建立以鼠尾胶原为贴附底物的人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式,为人鼻腔黏液纤毛运输系统的研究提供科学有效的方法.方法制备鼠尾胶原并铺片,以鼠尾胶原为贴附底物组织块培养法培养人鼻腔纤毛上皮细胞,培养7天时进行HE染色及扫描电镜和透射电镜观察细胞形态和结构,应用高速摄像技术测量纤毛摆动频率.结果鼠尾胶原要平坦均匀,平均厚度约为1mm;HE染色可见上皮细胞呈单层向周围爬开;扫描电镜下见纤毛上皮细胞呈不规则多角形,纤毛周围可见微绒毛;透射电镜下可见纤毛上皮细胞间为紧密连接;同一细胞任意两点纤毛摆动频率是相同的;同一来源体外培养的钩突和下鼻甲的纤毛摆动频率是相同的.结论以鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立,为今后研究鼻内用药对纤毛除去功能的影响提供了良好的方法和途径。鼠尾胶原醋酸溶解:在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。济南正规鼠尾胶原厂家推荐
要准备的器具:组织剪2把,有齿镊1把,无齿镊1把,200ml烧杯1个,培养皿1个,带盖广口瓶1个,离心管、小瓶数个,滴管若干。以上物品须经严格高压消毒灭菌。需配制的液体0.1%醋酸溶液。经44.48N10min高压蒸汽灭菌(或是过滤除菌)后备用。此外还有用消毒双蒸水配制75%酒精溶液。取大鼠尾巴,洗净,置75%酒精浸泡消毒后,手持尾巴,用止血钳夹住尾巴较高,折断尾骨后拉出尾腱,将尾腱剪碎后置消毒的三角烧瓶中,称尾腱的重量,按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液,摇晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置48小时,离心。吸取其上清,分装至小瓶,4℃保存。上述制备过程均在无菌条件下完成。石家庄正规鼠尾胶原厂家直销鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验长时程的记录。
酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原及相对分子质量和浓度检测鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,其腱性组织被水解成胶冻状溶液,从而分解成鼠尾Ⅰ型胶原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型胶原150μL滴在薄膜上,可形成液滴状胶原蛋白凝胶(,其生物力学强度极差,一碰即散。将鼠尾胶原蛋白进行SDS-PAGE,结果显示:Ⅰ型胶原蛋白原液在相对分子质量130000附近有明显条带,另一条带的相对分子质量大于170000(图2)。胶原蛋白浓度为1.8mg/mL。吸取矿化液倒入小培养皿中,将鼠尾Ⅰ型胶原纤维浸泡在矿化液中。矿化2、6d后,分别将矿化后的Ⅰ型胶原纤维进行TEM和电子衍射观察。
一种基于鼠尾胶原蛋白:1.根据权利要求1所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于冻干止血材料中,各材料重量配比为鼠尾胶原蛋白聚乙烯醇壳聚糖为5%2%1%,余量的水。2.根据权利要求1或2所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于鼠尾胶原蛋白来源于各品系SFP级大鼠鼠尾。3.根据权利要求1所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于剂型为创可贴。4.根据权利要求1所述的基于鼠尾胶原蛋白制备的可吸收止血材料,其特征在于剂型为喷雾剂。从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。
鼠尾胶原备用胶凝程序:1)在冰上放置以下物品:胶原蛋白I、无菌10×PBS、无菌蒸馏水、无菌1MNaOH。2)确定胶原蛋白I待使用溶液所需的较终浓度的体积。3)在冰上放置无菌管以收存胶原蛋白I。4)在无菌条件下执行以下步骤。4.1加入10×PBS(终体积/10)mL4.2计算要使用的胶原蛋白I的体积(不要添加到管中直到步骤4.6为止)终体积x终胶原蛋白I浓度(mg/mL)。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的胶原体积×0.023)mL的无菌冰冷1MNaOH。4.4向4.3溶液中加入下述体积的无菌冰冷蒸馏水:添加蒸馏水体积=V(终)—V(胶原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物质并放入冰中。4.6加入胶原蛋白I并计算体积,混匀,冰上备用。5)胶原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小时。6)使用时,无菌条件下将溶液加入到细胞培养装置中37°C凝胶30min。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁,涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录,并且制作简便,成本低廉。通常情况下骨质总量中的钙、镁、磷等无机物质光占总量的百分之几而胶原蛋白等有机物质却要占超过80%。珠海鼠尾胶原厂家
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鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项:通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿,培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶,模拟真实的生长环境,使细胞在三维环境中生长。1,在使用鼠胶原蛋白型包被的细胞培养皿中检查到PC-12细胞的贴壁和生长。1mg/ml浓度以上,pH左右时可形成具有一定强度的三维胶,检查到NIH-3T3细胞在三维胶内正常生长、PC-12细胞在三维胶表面正常生长。使用方法:1、细胞培养器皿的表面包被推荐浓度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格体积加到相应的培养器皿中。济南正规鼠尾胶原厂家推荐
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