北京斑马鱼实验标准

斑马鱼CRISPR基因编辑技术服务，含基因敲入品系制备、基因敲入品系制备、转基因品系制备等。斑马鱼基因敲入品系制备服务简介：1.基因敲入(Knockin)非同源依赖的DNA修复技术，在斑马鱼基因组定点插入外源DNA（荧光蛋白、PA等）。2.基因敲入技术特点2.1定点插入；2.2敲入效率较低。服务流程：根据客户基因敲入要求进行基因分析；cas9mRNA和多个gRNA靶点的设计及合成；高效gRNA靶点的筛选及效率验证；敲入载体设计及构建；斑马鱼胚胎的显微注射和敲入验证；F0代斑马鱼的可遗传性筛选；杂合子F1代斑马鱼的基因型鉴定。环特生物优势：国际前列的斑马鱼敲入技术以及上百例的成功经验；特有的高效筛选方法。斑马鱼实验的常见问题。北京斑马鱼实验标准

斑马鱼血管生成基因如血管内皮细胞生长因子（VEGF）、an-iopoietins、ephrions及相应受体与哺乳动物功能相似，而且斑马鱼血管系统及其对调节血管新生类药物的***反应与哺乳动物类似。另外斑马鱼胚胎在血液循环系统严重缺陷的情况下仍能存活，且胚胎透明，利用血管转基因荧光斑马鱼可以在24小时以内就定量评价药物的血管形成***作用。

与传统的鸡胚尿囊膜、小鼠角膜实验相比，斑马鱼更加便捷、快速、高效，而且结果定量分析的准确度更高。

目前多个出于临床试验阶段的抗血管生成靶向候选***药如SU5416、SU6668、TNP470、SU4312和AG1478等均对斑马鱼的血管形成有***的***效果。用斑马鱼筛选发现具有血管形成***活性的中***体化合物也有很多，如靛玉红、呋喃二烯等。 山西斑马鱼实验化学品斑马鱼胚胎和卵黄囊仔鱼阶段的短期毒性试。

斑马鱼敲除品系成功案例1、基因分析分析目的基因的保守结构域；2、靶点筛选设计4个gRNA靶点，PCR检测包含靶点的区域真实序列，显微注射验证靶点效率；3、大规模注射养殖F0Cas9pro+gRNA共注射，共养殖F0约80条用于后期Founder筛选；4、Founder筛选F0代斑马鱼与野生型外交，收集48hpf的F1胚胎抽取基因组，PCR鉴定，测序结果在靶点位置出现双峰的认为产生突变，然后TAclone验证其可能产生的突变方式；5、F1代筛选F1代斑马鱼剪尾筛选，TAclone验证突变方式：

截止目前，环特生物已通过国家CNAS实验室认可、CMA资质认定及 AAALAC国际实验动物认证。多项技术成果先后荣获德国纽伦堡国际发明金奖、英国国际发明展金奖及杰出创新奖、俄罗斯“新时代”第十六届国际发明与新技术展金奖、第48届日内瓦国际发明展银奖等国际大奖。近年来，环特生物承担省级（含）以上科研项目8项，相继被评为国家高新技术企业、浙江省科技型中小企业，且设有院士**工作站、省级****研发中心、浙江省博士后工作站等科研平台，并与中国农科院质标所成立了“农业农村部农产品质量标准研究中心生物评价实验室”的联合创新平台。斑马鱼实验提高药物研发效率。

斑马鱼在环境检测与化学品风险评估中的应用

斑马鱼早在1930年左右就已经在欧洲用于环境监测。目前OECD和ISO颁布的使用斑马鱼进行环境毒性测试的相关标准已经有10项。

ISO-15088-2008

Determinationoftheacutetoxicityofwastewatertozebrafisheggs

OECD化学品鱼类（斑马鱼）毒性测试标准：

OECD203（1992）Fishacutetoxicitytest

OECD204（1984）Fishprolongedtoxicitytest:14-daystudy

OECD210（1992）Fishearlylife-stagetoxicitytest

OECD305（1996）Bioconcentra-tion:Flowthroughfishtest

OECD212（1998）Fishshort-termtoxicitytestonembryoandsac-frystages

OECD215（2000）Fishjuvenilegrowthtest

OECD229（2009）Fishshort-termreproducti-onassay

OECD230（2009）21-Dayfishscreeningassay:AShort-TermScreeningforOestrogenicandAndrogenicActivity,andAromataseInhibition

OECD236（2013）FishEmbryoToxicity(FET)Test斑马鱼心血管毒性评价模型。辽宁分子发育与斑马鱼实验

斑马鱼在基础研究领域的应用。北京斑马鱼实验标准

通过在斑马鱼上鉴定与哺乳动物卫星细胞类似的肌干细胞群，并观察肌肉再生，可以记录体内损伤发生到修复的完整过程。这项成果由澳大利亚再生医学研究所的研究人员***发现，并将其发表于Science期刊上。这一发现可能为改善老年人和肌肉萎缩症患者的生活，甚至可以助力运动员的肌肉损伤恢复过程。

骨骼肌是一种可以借助一个能够自我更新的干细胞——肌卫星细胞来实现再生的组织，**近的体外研究已经强调了不对称分裂的重要性，但目前仍缺乏体内验证。通过在斑马鱼上鉴定与哺乳动物卫星细胞类似的肌干细胞群，并观察肌肉再生，可以记录体内损伤发生到修复的完整过程。该项分析充分揭示了卫星细胞、受伤和未受伤纤维之间复杂的相互作用，并为非对称卫星细胞分裂在自我更新和再生过程的重要作用提供了体内证据。 北京斑马鱼实验标准