上海细胞生物学膜片钳技术研究方案
膜片钳实验难度大、技术要求高,要掌握有关技术和方法虽不是很困难的事,但要从一大批的实验数据中,经过处理和分析,得出有意义、有价值的结果和结论,就显得不那么容易,有许多需要注意和考虑的问题,包括减少噪音,避免电极前端的污染,提高封接成功率,具体实验过程中还需要考虑如何选取记录模式,为记录特定离子电流如何选择电极内、外液,如何选择阻断剂、激动剂,如何进行正确的数据采集等许多更为复杂的问题,还需在科研实践中不断地探索和解决。膜片钳是一种能够直接观察单一的离子通道蛋白质分子对相应离子通透难易程度等特性的一种实验技术。上海细胞生物学膜片钳技术研究方案
膜片钳技术之全细胞记录的实验流程:(1)仔细检查实验系统各仪器间的线路连接。(2)依次打开各仪器的电源开关和实验软件,检查各参数的初始设置。(3)将样品置于倒置显微镜的载物台上。(4)电极安装。(5)偏移电位的补偿和电极电阻的测定:在微操纵器控制下使微电极进入浴液,电流基线通常会立刻漂离零位,若此时处于VC模式,在维持电压为零时,通过调节偏移电位补偿,使电流基线等于零,此时可见基线上叠加有响应电流方波。(6)细胞封接。(7)电极电容补偿:若无特殊要求,一般将保持电位设为受试细胞静息电位平均值。厦门细胞生物学脑片膜片钳哪家好膜片钳使用操作流程及注意事项:凡是在本平台使用仪器的同学必须履行实验室相关要求。
膜片钳技术之全细胞记录的优点:与传统的细胞内记录相比,全细胞记录也有很多好处,比如电极尖锐端开口较大,电阻只2~20MΩ,易于进行电压/电流钳制,噪声很大程度下降,电极电压降也变得很小,补偿非常容易。与单通道记录相比,单通道记录无法获得整个细胞的功能变化信息,而全细胞记录(尤其是脑片或在体记录)所获信息则能反映细胞功能(甚至细胞之间信息传递)的改变,加之易于更换细胞外液,所以,全细胞记录更适用于对离子通道的药理学研究,即加各种通道blocker啦,激动剂啦之类的。
膜片钳技术是通过微玻管电极(膜片电极或膜片吸管)接触细胞膜,用千兆欧姆以上的阻抗使之封接,在电学上分隔和电极尖开口处相接的细胞膜的小区域(膜片)以及其周围,在此基础上固定点位,对这膜片上的离子通道的离子电流(pA级)进行监测记录的方法。测量回路的中心部分是使用场效应管运算放大器构成的I-V转换器。当场效应管运算放大器的正负输入端子是等电位,向正输入端子施加指令电位时,因为短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的作用,字膜片微电极与默片之间形成10GΩ以上封接时,其间达到Z小的分流电流。膜片钳技术的应用范围:在心血管药理方面的研究。
膜片钳的应用:对药物作用机制的研究:在通道电流记录中,可分别于不同时间、不同部位(膜内或膜外)施加各种浓度的药物,研究它们对通道功能的可能影响,了解那些选择性作用于通道的药物影响人和动物生理功能的分子机理。这是膜片钳技术应用较普遍的领域,既有对西药药物机制的探讨,也普遍用在重要药理的研究上。如开丽等报道细胞贴附式膜片钳单通道记录法观测到人参二醇组皂苷可抑制正常和“缺血”诱导的大鼠大脑皮层神经元L-型钙通道的开放,从而减少钙内流,对缺血细胞可能有保护作用。陈龙等报道采用细胞贴附式单通道记录法发现乌头碱对培养的Wistar大鼠心室肌细胞L-型钙通道有阻滞作用。膜片钳和电压钳的区别:电压钳技术只能用来研究整个细胞膜或一大块细胞膜上所有离子通道活动。莆田神经生物学实用膜片钳哪家好
全自动膜片钳系统技术指标:外灌流时间常数:~200ms;内灌流时间常数:~2s。上海细胞生物学膜片钳技术研究方案
膜片钳技术发展至今,已经成为现代细胞电生理的常规方法,它不只可以作为基础生物医学研究的工具,而且直接或间接为临床医学研究服务,目前膜片钳技术普遍应用于神经(脑)科学、心血管科学、药理学、细胞生物学、病理生理学、中医药学、植物细胞生理学、运动生理等多学科领域研究。随着全自动膜片钳技术(Automaticpatchclamptechnology)的出现,膜片钳技术因其具有的自动化、高通量特性,在药物研发、药物筛选中显示了强劲的生命力。上海细胞生物学膜片钳技术研究方案
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