浙江RPMI-1640细胞培养基检测

    无血清培养基中通常需要添加一些额外的组分，才能帮助细胞贴壁生长，包括以下几大类物质：1）促贴壁物质：一般为细胞外基质，如纤连蛋白、层粘连蛋白等。它们还是重要的分裂素以及维持正常细胞功能的分化因子，对许多细胞的繁殖和分化，起着重要作用。纤连蛋白主要促进来自中胚层细胞的贴壁与分化，这些细胞包括成纤维细胞、肉瘤细胞、粒细胞、肾上皮细胞、肾上腺皮质细胞、CHO细胞、成肌细胞等。2）促生长因子：针对不同细胞添加不同的生长因子。也是刺激细胞生长、维持细胞功能的重要物质，有些是许多细胞必不可少的，如胰岛素。3）酶抑制剂：培养贴壁生长的细胞，需要用胰酶消化传代，在无血清培养基中需含酶抑制剂，以终止酶的消化作用，达到保护细胞的目的。常用的是大豆胰酶抑制剂。4）结合蛋白和转运蛋白：常见如转铁蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加量比较大，可增加培养基的粘度，保护细胞免受机械损伤。许多旋转式培养的无血清培养基都含有牛血清白蛋白。5）微量元素：硒是常见的。针对细胞培养应用，我们提供多种组分的MCDB改良培养基。浙江RPMI-1640细胞培养基检测

    1.细胞培养基的种类按照细胞培养基的发展历史，细胞培养基大致可分为平衡盐溶液、天然细胞培养基、合成细胞培养基、无血清细胞培养基、限定化学成分细胞培养基等几大种类。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由无机盐、葡萄糖组成，它的作用是维持细胞渗透压平衡，保持pH稳定及提供简单的营养。其主要用于细胞的漂洗、配制其他试剂等。几种常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's与Hank's的一个主要区别是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因为Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成份，参与细胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免细胞结团。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基础溶液，前者缓冲能力较弱，适合于密闭培养；后者缓冲能力较强，适合于5%CO2的培养条件。天然培养基指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、鸡胚浸出液等。其优点是营养成分丰富，培养效果良好，但缺点是成分复杂，来源受限且制作过程复杂、批间差异大。目前使用的天然培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白经蛋白酶和肽酶水解的产物。江苏实验细胞培养基源头直供MCDB 131培养基不同于传统培养基之处在于，其含有微量元素、腐胺、腺嘌呤及更高浓度的氨基酸和维生素。

    Ham’sF-12K培养基是Ham’sF-12营养混合物的Kaighn’s改进型，在Ham’sF-12的基础上提高了氨基酸和**酸的浓度，降低了葡萄糖的用量，并修改了盐的成分和含量（Konigsbergs）。Ham’sF-12K培养基**初设计用于培养原代人肝细胞以及分化的大鼠和鸡的细胞。针对较广的细胞培养应用，我们提供多种组分的Ham’sF-12K改良培养基。L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必需的一种营养元素，但其在溶液中不稳定，会自发降解，不含L-谷氨酰胺的培养基，可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量，在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。NEAA（非必须氨基酸），是在MEM培养基的基础上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（门）冬酰胺、L-天（门）冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种NEAA，能降低细胞培养时细胞自身生产非必须氨基酸的副作用，有效促进细胞增殖代谢。

    RPMI-1640细胞培养基RPMI-1640是Moore等人于1967年在美国纽约州法罗市的罗斯韦尔公园纪念研究所（RoswellParkMemorialInstitute,RPMI）开发出来的，RPMI是该研究所开发的一类细胞培养基，1640是培养基代号。RPMI-1640是改进型的McCoy‘s5A培养基，使用碳酸氢盐缓冲系统，与大多数哺乳动物细胞培养基不同的是其典型的PH8的配方。RPMI-1640培养基**初是为淋巴细胞培养专门设计的，现在已广泛应用于各种正常细胞和*细胞的培养，包括HeLa细胞、Jurkat细胞、MCF-7细胞、PC12细胞、PBMC细胞、星形胶质细胞和*细胞，是使用**为***的培养基之一。RPMIRPMI1640培养基相比其他培养基之所以具有独特的效果，是因为其中含有还原剂谷胱甘肽和高浓度的维生素。RPMI1640培养基含有生物素、维生素B12以及PABA，这些成分是Eagle’sMEM和DMEM所不具备的。针对***的细胞培养应用，我们提供多种组分的RPMI1640改良培养基。RPMI-1640细胞培养基L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必需的一种营养元素，但其在溶液中不稳定，会自发降解，不含L-谷氨酰胺的培养基，可以根据研究需要任意调整L-谷氨酰胺的用量，在使用时添加新鲜的L-谷氨酰胺或其替代物更利于细胞的生长。L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。DMEM/F12培养基是在DMEM培养基的基础上，添加F12培养基中更为丰富的营养成分。

    其本质为含有盐、氨基酸、维生素和其他必需营养物的pH缓冲的等渗混合物。在此基础上，DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各种合成细胞培养基被不断开发出来。常用合成培养基的配方此处不详细介绍。MEM（MinimalEssentialMedium）培养基MEM（MinimalEssentialMedium）培养基有含Earle's平衡盐的类型，也有含Hanks'平衡盐的类型；有高压灭菌型的，也有过滤除菌型的；还有含非必需氨基酸的类型。是基本、适用范围广的细胞培养基。DMEM细胞培养基DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培养基的基础上改良获得的，各成分份量加倍，分低糖（1000mg/L）、高糖（4500mg/L）两种类型。细胞生长快。附着稍差的肿瘤细胞、克隆培养用高糖效果较好，常用于杂交瘤的骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞培养。IMDM细胞培养基IMDM（Iscove’smodifiedDMEM）是由Iscove在DMEM基础上改良，增加了几种氨基酸和胱氨酸量等。可用于杂交瘤细胞培养，以及无血清培养的基础细胞培养基。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，适于多种正常细胞和肿瘤细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素。McCoy’s 5A培养基是Thomas McCoy等人在1959年设计的培养基，初专门用于Novikoff Hepatoma细胞的培养。云南RPMI-1640细胞培养基

Ham’sF-10营养混合物（Ham’sF-10Nutrient Mixture）是由Ham针对CHO细胞无血清培养设计出的一种培养基。浙江RPMI-1640细胞培养基检测

    L-谷氨酰胺（Glutamine）是细胞培养中所必要的一种营养，但其在溶液中不安定，会自发降解生成氨和焦谷氨酸，其中氨对细胞危害；而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中格外的安定，不会自发的降解。细胞运用其机制是：在细胞培训时，细胞会日益向培养液中获释一种肽酶，将L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺，而后细胞会将这两种水解产物吸收运用。细胞运用L-丙氨酰-L-谷氨酰的过程与流加培养方针相像，连续的将低浓度水准的L-谷氨酰胺加入到培养液中，从而提高了L-谷氨酰胺的利用率，且不会生成剩余的氨，更有利于细胞的生长。L-丙氨酰-L-谷氨酰可以取而代之等摩尔的L-谷氨酰胺，适用于所有的细胞，几乎无须适应，并且可以延长细胞的培养时间，缩减传代次数，即节约了时间也节省了钱财。与添加L-谷氨酰胺的培养基中培训的细胞相比之下，活性减低得更慢。延滞期稍为延长的缘故是肽酶的释放和二肽的消化需一定的时间。NEAA（非须要氨基酸），是在MEM培养基的基本上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天（门）冬酰胺、L-天（门）冬氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸和甘氨酸7种NEAA，能下降细胞培育时细胞自身生产非须要氨基酸的副作用，有效性推动细胞增殖代谢。葡萄糖可以根据研究需。浙江RPMI-1640细胞培养基检测

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