美国荧光显微钙成像采购信息
JaneliaResearchCampus霍华德休斯顿医学研究所(HHMI)ScottSternson课题组研究了影响这种源源不断的食欲的神经机制。他们通过使用Inscopix小显微镜观察小鼠脑干区域的神经元,发现贪念美食的小鼠可能是因为特殊的大脑区域对美食和奶茶比其他小鼠更加敏感。本能会驱使我们在感到饥饿和干渴的时候寻找食物,在找到食物或水时通过眼睛看、鼻子闻、嘴巴尝等方式来感受和决定要不要吃,吃到一定程度产生满足感(或是吃了还想吃的不满足感)。因此,要把大脑中汇集的关于吃喝的各类信号分清楚,并找出控制不同吃喝行为的神经环路无疑是很有挑战的任务。ScottSternson博士的研究团队在小鼠大脑中寻找饥饿和干渴神经环路共存的脑区。他们注意到,脑干的蓝斑区(locuscoeruleus)附近有一群谷氨酸能神经元(被称为periLC神经元),参与进食和饮水的行为,是饿和渴的汇聚点。为了研究这些神经细胞的功能,研究小组开发了一种技术,可以让小鼠在自由活动的同时,通过Inscopix自由活动钙成像显微镜观察记录脑干中periLC神经元的活动。这项研究的作者龚蓉博士表示,解决这个技术是此项研究的关键。功能性多神经元钙成像是一种通过记录神经元内Ca2+信号变化,监测大量神经元动作电位的光学记录技术。美国荧光显微钙成像采购信息
通过筛选天然与人工合成的融合体,在小鼠与斑马鱼幼虫身上成功得到以为靶点的致密神经回路报告,报告显示来自神经纤维的伪信号明显减少,信噪比增加,神经元之间的伪影相关性降低。这些结果均说明GCaMP6f和GCaMP7f的细胞体靶向变体(Soma-GCaMP6f,Soma-GCaMP7f)对提高单光子荧光成像技术的精细性起到着重要作用。这种胞体靶向突变体对提高神经信号标记的精细性是否具有组织特异性或物种特异性呢?研究团队针对这一问题,分别在小鼠不同脑区以及斑马鱼幼鱼的整胚转染和斑马鱼不同发育时期的信号采集等方面进行研究。合肥神经细胞钙成像inscopix钙成像技术在神经科学研究中的应用。
转基因Ca2+指示剂:转基因技术和光遗传技术的飞速发展,催生了基因编码的Ca2+指示剂(GECIs)。它们不依赖于荧光染料,可以靶向特定的组织,如神经细胞、心肌细胞、T细胞等,并且可以避免荧光指示剂带来的的许多问题,是监测转基因动物体内钙离子的一个极好的工具。个基因编码的钙离子指示剂Cameleon早在1997年就发表了。它是利用与钙离子结合后发生结构变化,作为供体的CFP和作为受体的YFP之间产生FRET的原理。2000年,GCaMP诞生了。它是增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和钙调蛋白(结合钙离子)、钙调蛋白结合肽M13组成的,结合钙离子后,钙调素-M13相互作用引起GFP空间结构变化,发出绿色荧光(图5)。GCaMP的问世有着**性的意义,它改变了我们观察神经元群体活动的方式,让科学家们可以在成千上万的细胞中,看到哪些神经元在放电,它们放电的模式和规律是怎样的,从而进一步探索各种内在的神经机制。
神经元钙成像技术离不开钙离子指示剂的应用,不同类型的指示剂各有其独特的功能。那么这些指示剂是如何负载细胞的呢?目前有三种在神经元上填充钙离子指示剂的方法,且都可以用于体内和体外研究。第一种方法是利用玻璃吸管将膜渗透性盐或葡聚糖形式的指示剂注入单个神经元中。此方法方便实验者控制单个神经元内的钙离子指示剂浓度且信噪比较高。第二种是利用“批量加载”的方法将钙离子指示剂染料负载神经元,观察对象为一群神经元。尽管此方法可能导致一些胶质细胞也被指示剂所标记,但提高了整体神经元的标记百分比,使研究者得以观察到一群神经元内动作电位相关性的活动。第三种也较为常用,通过病毒转染的方式使其基因编码钙离子指示剂。长时间追踪相同细胞,进行可重复的科学研究对自由行为动物进行慢性钙成像研究。
nVista神经元超微钙成像系统是可以在自由活动的动物上进行大范围的动态荧光成像的设备。通过nVist,您可以视觉化细胞活动,同步行为学,以及长期追踪神经环路的活动。nVista被应用于全球的研究机构中,产生了影响力的大数据库。主要特征:利用GCamp钙离子探针进行成像·功能完整的数据采集软件,实现对焦,调焦,行为同步化单细胞分辨率下,可同时捕获成百上千神经元活动长时间追踪细胞,追踪时间可长达数月电子对焦,保证视野范围的恒定自由动物行为学:可运用标准行为学测量方法,行为操作箱,迷宫,旷场等可进行皮层,深部核团,以及脑干,中脑等区域的成像记录动物无需进行适应性训练钙离子成像+自由活动行为学1.锚定特殊细胞类型,例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.单细胞的空间分辨率,可以分析细胞在空间内的mapping和编码信息3.动物可在大范围的旷场内自由活动4.长时程追踪同一细胞的放电规律变化:用于学习,记忆,药物成瘾等研究。5.可对脑内的深部核团进行记录nVista神经元超微钙成像系统成像效果好。神经元超微钙成像系统技术参数专业的数据采集软件Inscopix数据采集软件可记录成百上千个神经元细胞。电子调焦功能,可通过软件实现物理调焦。用标准行为测定法进行成像和行为实验的时间同步可进行深部脑区钙成像。上海常见钙成像销售公司
利用钙离子指示剂检测组织或细胞内钙离子浓度,进而反应组织或细胞内某些活动或反应。美国荧光显微钙成像采购信息
对于成像和长时间成像,较重要的是要保证细胞的正常生长。荧光团受激发光光照后产生的氧化物质与蛋白质、核酸和脂肪等发生反应,荧光信号降低的同时(光致退色)也降低了细胞寿命(光线损伤)。在光照过程中氧化剂的产生,主要决定于荧光团的光化学性质和光照剂量,因此减少光照剂量成为解决上述问题的途径之一。光漂白(Photobleaching)指在光的照射下荧光物质所激发出来的荧光强度随着时间推移逐步减弱乃至消失的现象。荧光成像的质量很大程度上依赖于荧光信号强度,提高激发光强度固然可以提高信号强度,但激发光的强度不是可以无限提高的,当激发光的强度超过一定限度时,光吸收就趋于饱和,并不可逆地破坏激发态分子,这就是光漂白现象。在显微技术中,光漂白使得观测变得很复杂,因为它会造成破坏,使萤光团无法继续放光,从而干扰实验结果。美国荧光显微钙成像采购信息
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