科研用数字ELISA检测平台开发

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每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测

珠子以两种不同的方式读出。首先，在与100μMresorufin-阝-D孵育1小时后，用荧光板读出器以100μL方式读出珠子结合-半乳糖苷（RGP），一种荧光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板阅读器上，检测限为15fMofS阝G（图2）。其次，将珠子加载然后将RGP溶液密封到阵列的孔中，单个酶的信号被允许在反应室中积累，并每30秒获取一次荧光图像。实验结束时获取阵列的白光图像以识别含有珠子的孔（含有珠子的孔散射光与空井不同）。荧光图像用于确定哪些微球具有相关的结合酶（从时间变化的荧光图像中强度增加）。图2显示了微球中含酶的比例与总体S阝G浓度的关系的对数-对数图。检测到的比较低酶偶联物浓度为350飞摩尔（zM），并通过外推信号等于的酶浓度计算得出的检测限（LOD）。 芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品，微量检测，使用10uL样本就能测试；科研用数字ELISA检测平台开发

    芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测我们的方法利用了亚飞克尔反应室阵列（图1C）我们称之为单分子阵列（SiMoA）——可以分离和检测单个酶分子20-24。这种方法借鉴了Walt等人20-23的工作阵列用于研究单个酶的动力学和抑制作用。我们的目标是利用捕获和检测单个酶的能力来检测用酶标记的单个蛋白质分子。在这个单分子免疫测定的第一步（图1A)，在微球（直径μm）上形成一个三明治抗体复合物，结合的复合物用酶标记，如同常规的基于微球的ELISA。当测定含有极低浓度蛋白质的样品，蛋白质的比值分子（以及由此产生的酶标记复合物）与微球的比例很小（通常小于1：1)，因此含有标记免疫复合物的微球百分比遵循泊松分布，导致单个微球上存在单一免疫复合物。例如，如果在(3000个分子）的蛋白质中捕获并标记了50μM的蛋白质，并且在200，000个微球上进行标记，则珠子，然后，。无法检测到这些低数量的酶使用标准检测技术（例如，平板阅读器）的标签，因为荧光染料由每种酶生成的产物扩散到一个大卵试验体积（通常为)，并进入其中需要数十万种酶标签才能产生高于该水平的荧光信号背景。 亚皮克级数字ELISA高灵敏芯弃疾JX-8B单分子普惠化ELISA检测产品，人人都用能得起的单分子检测；

    芯弃疾JX-8B数字ELISA产品每个生物实验室都用得起的单分子免疫检测SiMoA通过将单个酶产生的荧光团限制在极小范围内，从而能够检测到非常低浓度的酶标记物体积（~50fL），导致荧光产物分子的局部高浓度。为了在免疫测定中实现这种定位，在第二步中，将珠子加载到一个阵列为离散的微升大小的孔（图1C）。本研究中使用的2毫米宽阵列有~50,000个孔，孔径为μm，孔深为μm。加载后的阵列在含有荧光酶底物液滴的情况下，用橡胶密封圈密封。Rissin等人，第3页将每个微球隔离在飞升反应室中。具有单一酶的微球标记的免疫复合物在50飞升的反应室中产生局部高浓度的荧光产物（图1D）。通过使用标准显微镜光学系统获取阵列的时间变化荧光图像，可以区分与单一酶分子相关的微球（“开启”孔）和不与酶相关的微球（“关闭”孔）；补充图1显示了“开启”和“关闭”孔的荧光直方图。成像阵列可以成千上万的单个免疫复合物同时检测。通过测定供试品中的蛋白质浓度来确定计算含有珠子和荧光产物的孔数相对于含有珠子的孔数（图1D）。使用SiMoA，浓度是因此，我们称SiMoA应用于检测单个免疫复合物为数字ELISA。

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单分子的检测原理：由Simoa数字免疫分析法实现的超灵敏度已在先前讨论过。简而言之，类似免疫分析中的酶-底物反应是在相对较大的反应体积（50-100µL）中进行的，在信号生成步骤中稀释了产物分子。信号分子的扩散和稀释将灵敏度限制在皮摩尔范围内。相比之下，Simoa通过将单独标记的免疫复合物和底物限制在飞升大小的孔中，从而限制了荧光产物分子从酶-底物反应中的扩散。当单一酶标签催化底物转化为荧光产物时，产生的荧光团被限制在孔中，从而在短时间内产生可测量的荧光信号。芯弃疾JX-8B数字ELISA，超敏检测，常规试剂可轻松达到0.2pg！

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我公司推出的数字化高灵敏ELISA芯片检测产品应用场景：适合生物实验室、医学实验室、科研市场、产品预研、产品开发、ELISA检测、动物病情检测等各种应用场景应用范围：各种高灵敏多重免疫检测，可替代各种ELISA试剂盒，及其他免疫检测产品。

在前列腺切除术后患者中，能够准确量化PSA水平的能力，即使在非常低的浓度(<300fM或10pg/mL）下，也应提供如果PSA水平升高，早期提示复发17,29。图4显示PSA水平使用数字ELISA在30名接受治理性前列腺切除术且术后至少6周采集血液的患者血清中进行测量。所有30例患者的血清PSA水平均低于商业检测限采用PSA数字ELISA（图3A)对全血清样本进行稀释1：4后测定，成功检测到所有30例患者中PSA，浓度范围为14fg/mL至9.4pg/mL，平均浓度为1.5pg/mL。需要进一步的临床研究来确定在RP患者中测量PSAfg/mL水平的诊断益处。 芯弃疾JX-8B数字ELISA，每个实验室都能用的单分子检测；高科技数字ELISA购买灵活

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从TNF-α数字ELISA测定的检测限为~150aM（2.5fg/mL），相当于全血中的~600aM（10fg/mL）；市场上可用的ELISA对TNF-α的比较高灵敏度在血清中的LOD为21fM(0.34pg/mL）（补充图3）。两种方法的目标蛋白零浓度尖峰均为为这些实验提供有用的阴性对照：25%的血清含有多种蛋白质的微摩尔浓度，在这些高蛋白质背景之上可以检测到非常低浓度的目标蛋白。我们还开发了一个证明用于显示低浓度核酸可以检测到的DNA的主要数字分析方法，而无需复制目标

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