温州正规鼠尾胶原

利用鼠尾Ⅰ型胶原构建与人类自体骨组织化学成分和分子结构相近的仿生骨材料。方法通过醋酸酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白，并重构成胶原纤维。然后，将重构后的胶原纤维放置在矿化液中模仿骨生物矿化2～6d，通过透射电子显微镜和电子衍射观察骨生物矿化。结果酸解提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白能够重构成胶原纤维，并且具有特征性的D-Band结构。透射电子显微镜和电子衍射显示：矿化2d后，羟基磷灰石钙前体渗入胶原纤维，胶原纤维部分矿化；矿化6d后，胶原纤维内部完全矿化，形成Ⅰ型胶原蛋白/羟基磷灰石钙的仿生骨材料。结论利用酸解法提取的鼠尾Ⅰ型胶原蛋白可以重构成胶原纤维，经矿化可形成与人类自体骨组织化学成分和分子结构一致的仿生骨材料。鼠尾胶原蛋白 型在浓度1mg/ml 以上， pH 左右时可形成具有一定强度三维胶。温州正规鼠尾胶原

鼠尾胶原醋酸溶解：1．将鼠尾胶原加入到0.1M的醋酸中，制备成浓度为0.1%的溶液。在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。2．建议将溶液转移到拧口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底铺上一层氯仿。氯仿的量约为胶原溶液的10%。不要晃动或搅拌。在2-8度中放置过夜。在无菌条件下转移上层的胶原溶液。我们不建议用过滤的方法无菌化。已经发现该方法会导致丢失蛋白。3．稀释一定数量的胶原溶液。4．按照6-10ug/cm2的浓度包被培养瓶。在室温或37度结合数小时或者2-8度过夜。5．从包被表面除去多余的液体。过夜干燥。如果胶原溶液不是无菌的，这时候可以在无菌细胞操作室中暴光在紫外线下过夜消毒。在接种细胞前用无菌的水漂洗。无锡鼠尾胶原生产厂家鼠尾胶原为贴附底物人鼻腔纤毛上皮细胞的体外培养模式的成功建立。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事项：三维胶原的制备鼠尾胶原蛋白型在浓度1mg/ml以上，pH左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06体积的0.1mol/LNaOH来中和。需要的溶液（均需要无菌、预冷）10mg/L酚红用于pH指示）0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一般不用)，双蒸水200ul鼠尾胶原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的离心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结）立即混匀。再加入100ul10PBS10培养液，混匀后立即加到培养器皿中(混匀后pH左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。

胶原的立体结构与一般的球状蛋白质完全不同，每一条亚基形成一股左手旋转的螺旋，其中每3个氨基酸残基形成一圈螺旋。3条左手螺旋再扭在一起形成一个右手大螺旋。这样的螺旋称为3股螺旋。小的甘氨酸残基位于3股螺旋内部。3股螺旋式的棒状胶原分子的大小约是3000×15埃，这些棒状分子首尾相连，并侧向排列形成胶原微丝（其直径可从50埃至数千埃）。胶原分子在两端及沿轴向每隔680埃的距离存在极性区，这些极性区能和重金属离子结合，使胶原纤维在电子显微镜下形成间距为680埃的明暗相间的特征性的横纹结构。鼠尾胶原蛋白用于生产明胶并添加到布丁和棉花糖中。

鼠尾胶原蛋白Ⅰ型使用说明：含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反过来把12ul0.1mol/LNaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul10×PBS或10×培养液，混匀(混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试)。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。论鼠尾胶原能促进毛细胞贴壁，涂布鼠尾胶原有利于膜片钳实验的长时程记录，并且制作简便，成本低廉。鼠尾胶原醋酸溶解：稀释一定数量的胶原溶液。开封正规鼠尾胶原厂家

鼠尾胶原醋酸溶解：在室温中搅拌1-3小时直到完全溶解。温州正规鼠尾胶原

鼠尾Ⅰ型胶原：材料与方法：1.主要材料、试剂和仪器鼠尾、盐酸、等渗氯化钠溶液、钙液、磷液均购自上海晶纯生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射线衍射仪。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型胶原蛋白取大鼠尾巴洗净，用75%的乙醇浸泡5min。将尾巴剪开，去掉皮毛，并剪成小段，抽出银色的肌腱。将肌键剪断置于平皿中，用无菌等渗氯化钠溶液浸泡。吸去等渗氯化钠溶液，将肌键置于平皿中剪碎，按每克肌键50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。摇晃，将肌键分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g离心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成胶冻状凝胶，置于冰箱4℃保存。温州正规鼠尾胶原