南京Balbc裸鼠疾病动物模型建模

技术领域：本发明属于遗传学和生物技术领域，具体涉及pirb基因敲入的小鼠动物模型，还涉及上述小鼠动物模型的构建方法。背景技术：鼠源成对免疫球蛋白样受体b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人类免疫球蛋白样受体b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7号染色体近端，总大小为，编码841个氨基酸，目前鉴定出15个外显子，外显子1起始密码为atg，外显子15的终止密码子是tga(转录本：)。pirb蛋白属于i型跨膜糖蛋白，包含由六个免疫球蛋白样结构域(domain，d)组成(d1-d6)的胞外段，一个疏水的跨膜段，三个免疫受体酪氨酸依赖的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一个itims样序列组成的胞内段。理论上讲，pirb的分子量约为92kd，但是western-blot分析中，pirb经常位于105kd处，因为pirb是糖蛋白。以往研究发现，pirb在免疫系统和中枢调节中均发挥重要作用。在免疫系统中，pirb在许多造血细胞都有表达，包括b细胞、肥大细胞、巨噬细胞、粒细胞和树突细胞，但是在胸腺细胞、成熟的t细胞和自然杀伤细胞不表达。这类动物疾病模型是指各种疾病共同性的一些病理变化过程的模型。南京Balbc裸鼠疾病动物模型建模

葡聚糖硫酸钠（DSS）致溃疡性结肠炎小鼠模型：1、动物模型名称：葡聚糖硫酸钠（DSS）致溃疡性结肠炎小鼠模型2、实验动物种属：BALB/c小鼠3、实验动物性别：雄性4、实验动物年龄：成年鼠5、实验动物体重：18g-22g6、实验动物环境：SPF级1、实验方法：实验前小鼠禁食不禁水24h，24小时后提起鼠尾将其悬空，使挣扎以排出大肠远端的大便。小鼠自由饮用5%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液，连续14天。进行疾病活动指数(DAI)的评估、取结肠进行组织病理学检查。2、检测标准：DAI评分明显升高，与对照组比较具统计学意义。结肠病理镜检可见结肠炎症、病变深度、隐窝破坏、溃疡病变.酒精肝疾病动物模型建模供应商可以严格控制实验条件，增强实验材料的可比性。

2mg组、4mg组、6mg组lh水平均上升，同样，只有2mg组有明显升高(p＜)，如图3所示。表3表4②体重变化：(mean±sd)，如图4所示：2mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第2天开始)。3mg组(连续注射7天)与空白组相比，大鼠体重***下降(p＜，注射第4天开始)，直至第12天*存活1只大鼠。4mg、6mg组(第1、8天注射)与空白组相比，大鼠体重分别在***次及第二次注射后的有***下降(p＜)，4mg组体重在停止给药后4天与空白组无差异。③卵巢重量：如表5、图5所示，2mg、6mg组大鼠在经过顺铂注射后卵巢重量相比对照组，都有不同程度缩减，其中2mg组卵巢重量明显减轻(p＜)，4mg、6mg组无明显差异。表5④动情周期观察(阴道涂片)：3mg组动物死亡时间早，无完整的动情周期。如表、图6所示。正常大鼠动情周期4-5天。分为四个阶段，动情前期：撇圆形有核上皮细胞占绝大多数，白细胞和角化上皮细胞很少(图a)。动情期：角化上皮细胞占多大多数，由散在增至集白细胞和有核上皮细胞很少(图b)。动情后期：片状角化上皮细胞，有核上皮细胞和白细胞3种都有，无太大差异(图c)。动情间期：白细胞占绝大多数，有核上皮细胞和角化上皮细胞很少(图d)。

    SD大鼠脑缺血模型建立一、目的：SD大鼠脑缺血致脑梗死模型的建立二、试剂耗材：水合氯醛、线栓直径（体重250-300g）三、方法：1、10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。2、仰卧位固定，颈正中线切口，分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。3、微动脉夹暂时夹闭颈内动脉（ICA），活扣结扎近心端颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）打双结，在双结中间剪开小口插入线栓。4、将拴线插入到颈内动脉（ICA），用眼科镊轻推拴线，以颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）分叉处为参考位置。5、栓线插入预刻深度，感到有阻力，说明栓线已到达脑中动脉（MCA）,打结固定栓线。6、血管外的栓线不要留得过长，1h后拔出栓线，缝合伤口，单笼饲养观察。注：前两三天老鼠会萎靡，不进食，注意不要，老鼠无死亡即可。人类疾病的动物模型是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物。

    ng）=×片段碱基对数（单片段）；适片段用量（ng）=×片段碱基对数（多片段）。注1：单片段重组反应，若单个插入片段的长度大于载体，则应将载体与插入片段的计算公式互换；注2：单片段重组反应，若单个插入片段的长度小于200bp，则插入片段应使用5倍的用量；注3：多片段重组反应，各个插入片段的用量应不少于10ng，使用上述公式计算适使用量低于此值时，直接使用10ng；注4：若按上述公式计算出的线性化载体用量低于50ng或高于200ng，建议按50ng或200ng用量使用；注5：线性化载体过长，插入片段过长或片段数过多，克隆阳性率均会降低。2、体系反应；1、配制完成后，用移液器轻轻吸打混匀各组分，避免产生气泡，切勿涡旋；2、将反应体系置于50℃，反应5~60min。3、将反应液离心管置于冰上冷却，之后进行转化或者储存于-20℃注1：推荐使用PCR仪等温控的仪器进行反应，反应时间不足或太长克隆效率均会降低；注2：插入1~2个片段时，推荐反应时间为5~1min；插入3~5个片段时，推荐反应时间为15~30min；注3：当载体骨架在10kb以上或插入片段总长在4kb以上时，推荐延长反应时间至30~60min；注4：建议在50℃反应完成后进行瞬时离心，将反应液收集至管底。注5：-20℃储存的重组产物。上海东寰为您提供完善的小鼠动物疾病模型。长宁区心血管疾病疾病动物模型建模

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即为本发明构建的一种pirb基因敲入的小鼠动物模型。本发明所采用第二种技术方案的特点还在于，步骤1中得到grna1和grna2后分别与trancrrna在25℃孵育10min形成二级结构。步骤3中grna1、grna2的浓度均为2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射浓度为30～100ng/μl。步骤4中southern杂交采用bamhi和avrii核酸内切酶切割f1代杂合子小鼠的dna。本发明的有益效果是：本发明提供了pirb基因敲入的小鼠动物模型及其构建方法，本发明的小鼠动物模型对于pirb基因功能的研究和在体验证提供了良好的基础。分离自pirb基因敲入小鼠的细胞还可以用于研究pirb发挥调节作用的下游机制。南京Balbc裸鼠疾病动物模型建模