天津MEM培养基有哪些
7)溶液应在2℃-8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。2)配制可高压**细胞培养基(1)根据所需将培养基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)将袋内残留培养基洗下,并入容器。加注射用水至总体积的95%,轻微搅拌溶解。(2)在121℃、15psi下**15分钟。(3)待溶液冷却至室温,加入无菌mol/LL-谷氨酰胺溶液规定体积、无菌%(w/v)碳酸氢钠溶液规定体积,加注射用水(20℃~30℃)至规定体积,混匀。(4)如果必要,用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。(5)溶液应在2℃-8℃下避光保存。具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。注意事项1)细胞培养用水一般为三蒸水(经石英蒸馏器蒸馏)或超纯水,医*生产上一般为注射用水。2)建议尽量选择与所用量相匹配的包装一次使用,因为包装一旦打开,组分可能会变质或因受潮而结团。3)溶解干粉培养基时先加入终体积90%-95%的培养用水,添加剂加完后再补足。4)如需添加的组分较多时,某一组分完全溶解后,再添加另一组分。5)待培养基完全溶解后再加入碳酸氢钠,以免产生沉淀。6)所有成分完全溶解后,培养基应立即过滤或高压**,以免产生沉淀或有微生物污染。7)在过滤**时。无血清培养基适合于需要无血清环境的细胞系。天津MEM培养基有哪些
SLM)低血清培养基添加1%小牛血清在转瓶中培养CHO细胞生产EOP,可提高收液次数,每次收液表达量明显提高。概述无血清培养基是用来在无血清条件下生长特殊类型的细胞或进行专门应用的培养基。一般是由基础培养基和替代血清的补充因子组成。无血清培养基中没有添加血清,但含有个别蛋白或大量蛋白组分。无血清培养基与无蛋白培养基的区别在于培养基中没有添加蛋白,但含有一些动物或植物来源成分,如低分子量肽的水解物。还有一种化学限定培养基,培养基中不含有蛋白、水解产物或未知结构的组分,所有成分均有已知的化学结构。***:1)未知组分少;2)培养基中不存在血清中的抗体、补体等成分,对培养细胞影响小;3)杂蛋白含量少,生产的产品后期处理较容易,例如*苗生产由于人用*苗需要纯化减少杂蛋白,纯化过程中成本消耗很大,*苗的损失也很大;4)无血清培养既可以实现细胞的大规模悬浮培养,增加培养液的利用率,可以采用发酵罐培养减少了人力消耗。缺点:目前为止不是所有的细胞都能在无血清培养基中培养。无血清培养基的某些组分价格昂贵,导致无血清无法工业推广的主要原因。云南DMEM高糖培养基技术指导使用减血清培养基能减少实验的误差和干扰。
生产上一般采用冷水喷淋冷却,冷却到40-50℃后,输送到预先已经**过的罐内。(四)、间歇**与连续**的比较1、歇**的***和缺点***是设备要求低,不需另外设置加热、冷却装置;操作要求低,适于手动操作,适合于小批量生产规模;适合于含有大量固体物质的培养基的**。缺点是培养基的营养物质损失较多,**后培养基的质量下降;需进行反复的加热和冷却,能耗较高;不适合于大规模生产过程的**;发酵罐的利用率较低。2、连续**的***和缺点***是**温度高,可减少培养基中营养物质的损失;操作条件恒定,**质量稳定;易于实现管道化和自控操作;避免了复的加热和冷却,提高了热的利用率;发酵设备利用率高。缺点是对设备的要求高,需另外设置加热、冷却装置;操作较麻烦;染菌的机会较多;不适合于含大量固体物料的**;对蒸汽的要求高。由此可见,无论在理论上或者在实践上,与间歇**过程相比,连续**的***十分明显。因此,连续**越来越多地被用培养基的**。
培养实例2:兰兹贝格型拟南芥无菌植株培养培养实例2与培养实例1不同的地方在于:步骤(1)所用种子为兰兹贝格(ler,landsbergerecta)型拟南芥种子,兰兹贝格拟南芥较哥伦比亚拟南芥具有更早的花期,在适宜条件下培养,可以获得处于各发育时期的拟南芥无菌***,包括根、胚轴、叶柄、子叶、莲座叶、茎、花、角果等,其余完全同培养实例1。1/2cs生长培养基的培养结果为:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2cs生长培养基上的萌发率为100%,培养28d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,莲座叶发达、平均**大莲座叶长为,叶色浓绿,根系粗壮、平均主根长为,花序含有较多花朵,花粉形态和活力均正常、平均有活力的花粉为%。如图2所示。对比培养例2:将1/2cs基本培养基替换为1/2ms基本培养基,其余完全同培养实例2,1/2ms基本培养基的成分及用量如表1所示。1/2ms生长培养基的培养结果为:兰兹贝格型拟南芥种子在1/2ms生长培养基上的萌发率为100%,培养28d的幼苗,表现为植株健壮、平均株高为,莲座叶发达、平均**大莲座叶长为,叶色浓绿,根系粗壮、平均主根长为,花序发育良好,花粉形态和活力均正常、平均有活力的花粉为%。如图2所示。无酚红培养基确保了细胞实验结果的准确性。
因为解冻时可能会有营养成份析出,影响培养效果。正常情况下于2~8℃避光保存,使用前从冰箱取出,放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存,其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解,如果细胞生长不良,可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期,对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后,也应低温(2~8℃)贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外,培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5.细胞培养基使用过程中常见问题分析由于大多数细胞适宜的pH为,偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差,无限细胞系耐受力强。因此,原代培养时,培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统,但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同,如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统,例如RPMI1640培养基、F12培养基。MEM培养基在细胞培养中表现出良好的稳定性。四川培养基技术指导
RPMI1640培养基在抗体生产和免疫研究中有重要作用。天津MEM培养基有哪些
c、结果为:在用未调ph液体培养基进行培养时,整体长势从优至弱分别为1/2cs未调ph液体培养基、cs未调ph液体培养基、1/2ms未调ph液体培养基、ms未调ph液体培养基;在用ph调至,整体长势从优至弱分别为1/、、1/、;不论是否调ph至,cs液体培养基培养的马铃薯幼苗长势均优于ms液体培养基;不论是否调ph至,1/2cs液体培养基培养的马铃薯幼苗长势均优于1/2ms液体培养基。如图9和图10所示。说明,1/2cs液体培养基和cs液体培养基应用于植物水培时,不论是否调节ph至,均能获得很好的培养效果,克服了传统液体培养基必须调节ph后才适用于植物水培的缺点。**后说明的是,以上实施例*用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而其不脱离本发明技术方案的宗旨和范围,则均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。天津MEM培养基有哪些
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