西藏MEM培养基有哪些

    本发明涉及植物**培养技术领域，特别涉及一种植物**培养基。背景技术：ms培养基于1962年由murashige和skoog设计，是目前植物**培养中应用**为***的培养基。据《危险化学品安全管理条例》(***令第591号)、《民用物品安全管理条例》及《易制爆危险化学品名录》(2017年版)可知，ms培养基的主要成分硝酸钾、硝酸铵均为易制爆管制试剂，随着**监管越发严格，所有易制爆试剂的购买、储存及使用变得越来越困难，尤其是兼有硝态氮和铵态氮的硝酸铵，其纯品被禁止市场流通，为植物**培养带来很大难度。b5培养基于1968年由gamborg等为培养大豆根细胞而设计，n6培养基于1974年由朱至清等为水稻等禾谷类作物花*培养而设计，两者均由ms培养基衍生而来，在有些植物**培养研究中***应用，虽然b5和n6培养基除了硝酸钾外不含其他易制爆成分，但两者中的钙离子和镁离子含量均大幅降低，且b5培养基中铵离子大幅减少、n6培养基中钾离子大幅增加，这些离子浓度的大幅波动对一些植物的**培养是不利的。cna草莓增殖培养基公开了一种无硝酸铵培养基，但其硝酸钾及**铵含量过高，*适用于草莓**培养；cna一种草莓**培养基及其配制方法公开了一种无硝酸铵培养基，在草莓**培养中取得很好的效果。无酚红培养基适用于对酚红敏感的实验。西藏MEM培养基有哪些

    以及无血清培养的基础细胞培养基。RPMI-1640细胞培养基专门针对淋巴细胞培养设计，含有BSS、21种氨基酸、维生素等，***适于多种正常细胞和肿*细胞的培养，也用做悬浮细胞培养。HamF12细胞培养基含微量元素，可在血清含量低时用，适用于克隆化培养。F12适用于CHO细胞，也是无血清细胞培养基中常用的基础细胞培养基。DMEM/F12细胞培养基将DMEM和F12按照1:1比例混合，混合后营养成份丰富，血清使用量也减少。常作为开发无血清细胞培养基时的基础细胞培养基。与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用合成培养基时必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。**普遍的做法是添加5~10%的血清，这样才能维持细胞活力，促进细胞增殖。针对不同的动物细胞，现已开发了多种商业化、个性化的低血清细胞培养基配方，营养成份更加丰富，血清使用量可降低至1～3%，由此可减少了血清等动物来源成份对生物制品安全性的影响。（serumfreemedium，SFM）经历了天然培养基、合成培养基后，无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可降低生产成本，简化分离纯化步骤，避免**污染造成的危害。江苏DMEM高糖培养基无血清培养基有助于维持细胞的纯净生长环境。

    一般情况下应调pH比所需值低～，因过滤**后，pH值会升高约。8）在细胞培养过程中，建议不加或加少量的***，如血清的浓度较低则所加***的量也要相应降低一些。9）建议用1NHCl或1NNaOH来调节培养基的pH，因为用碳酸氢钠来调对培养液的渗透压影响比较大。如下图所示：图6-1MEM培养基（SLM，MD611）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压图6-2199培养基（MD502）在pH值相同情况下所加的碳酸氢钠、氢氧化钠的量及所对应的培养液渗透压培养基**培养基的**方法主要有两种，高压**及um微孔滤膜过滤**。与过滤相比，高压**的工作强度小，相对便宜，失败率低，但易造成营养成分的流失。高压**某些培养基（如MEM）可进行高压**，例如清大天一的MEM培养基中的MD605、MD609等。其中不含有L-谷氨酰胺和碳酸氢钠，可在高压**后加入。另外可高压的谷氨酸盐（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）可代替L-谷氨酰胺。为保证高压**的效果，**设备的验证很关键，可高压**的培养基在121℃、15psi，15分钟的条件下完全可达到**效果及营养成分的**小损失，因此不需将**时间延长。过滤**大多数培养基采用～μm孔径的微孔滤膜进行过滤**，并且已成为培养基**的发展方向。

    平衡盐溶液（balancedsaltsolution，BSS）简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体，兼具维持渗透压、缓冲和调节溶液的酸碱度、同时供给细胞生存所必需的能量和无机离子成分的作用。各种BSS的缓冲系统有所不同，其中以Hank’s液和Earle’s液为例，它们主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的pH值。Eagles液在空气水平的CO2中，溶液会变碱，Hank’s液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存**，需要用Earle’s液，。如果**是清洗将要在细胞培养基中储存的**，用Hank’s液就可以了。表3-1几种常用的平衡盐溶液配方（g/L）一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是细胞膜的重要组成成分，同时参与许多重要的细胞功能活动。但它们有使细胞凝集的作用，在配制分散细胞的消化液和特殊用途的细胞洗涤时，宜采用Ca2+、Mg2+含量较低的Dulbecco液或无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液，或者PBS液。概述基础细胞培养基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。无血清培养基为细胞培养提供了更清晰的背景。

    因为解冻时可能会有营养成份析出，影响培养效果。正常情况下于2~8℃避光保存，使用前从冰箱取出，放入室温进行平衡。通常的液体培养基有效期是6个月到12个月。液体细胞培养基尽量避免长期贮存，其中的谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解，如果细胞生长不良，可考虑检测培养基中的谷氨酰胺含量确定是否再补加谷氨酰胺。市售商业化液体细胞培养基有具体的有效期，对于使用干粉细胞培养基自行配制成液体以后，也应低温（2~8℃）贮存。除培养基中如谷氨酰胺易降解之外，培养基中的其他成份随着温度的升高也可能会发生降解或是析出。5.细胞培养基使用过程中常见问题分析由于大多数细胞适宜的pH为，偏离此范围可能对细胞生长产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养的细胞一般对pH变动耐受力差，无限细胞系耐受力强。因此，原代培养时，培养液中的缓冲系统就显得较为重要。一般的细胞培养基采用的都是平衡盐系统，但不同的培养基或是同一系列的培养基所用平衡盐系统不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系统的培养基及Earle’s系统的培养基。有些培养基不是上述常规的平衡盐系统，例如RPMI1640培养基、F12培养基。无血清培养基适用于需要无血清环境的细胞。福建RPMI1640培养基牌子

F12培养基适用于基因编辑和转染实验。西藏MEM培养基有哪些

    二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH值发生变化。酚红是细胞培养基中**常用的pH指示剂，但依靠细胞培养基中的酚红等pH指示剂进行判断，需要实验员的经验积累，存在较大的主观性。实际上，个性化细胞培养基或是无血清细胞培养基中酚红含量较少或是不含酚红，只能通过pH计或者pH电极进行pH值的检测，结果更为准确可靠。缓冲能力细胞培养基应具有一定的缓冲能力。细胞培养过程中造成细胞培养液pH波动的主要物质是细胞代谢产生的CO2。在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，细胞培养液pH很快下降；打开培养器具时CO2逸出则会引起pH升高。细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统，按下列化学反应方程式调节细胞培养基的pH值：H2O+CO2→H2CO3⇌H++HCO3－NaHCO3⇌Na++HCO3－此外，还有缓冲能力较高的磷酸盐缓冲系统。但碳酸盐缓冲系统的细胞毒性小、成本低，在细胞培养中应用得更为***。另一种较为常用的缓冲液是HEPES（羟乙基哌嗪乙硫磺酸）液，它是一种非离子两性缓冲液，在pH~。高浓度的HEPES可能对细胞**性作用，细胞培养时HEPES的添加浓度一般为10～25mmol/L。渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数体外培养的细胞对渗透压有一定耐受性。研究显示。西藏MEM培养基有哪些