293细胞PEI转染试剂优化方案

时间:2022年08月07日 来源:

接种细胞:转染前,用胶原酶消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,总体积如表1所示,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。孵育细胞和分析结果:在CO2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后快7h即可检测到转入基因的表达。请自行确定检测时间。PEI转染试剂主要用于大规模的蛋白表达和病毒包装。293细胞PEI转染试剂优化方案

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材料:质粒DNA指数生长的真核细胞PEI(聚乙烯亚胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI储存液(100μM):称取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm滤膜过滤,储存于4℃备用。1×HBS(pH7.4):将8.76gNaCl溶解于900ml超纯水,加入20ml1M的HEPES,调pH值到7.4,定容至1L,过滤(0.2μm滤膜)后储存于4℃备用。方法:1.细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。聚乙烯亚胺PEI转染试剂用途PEI 25K和40K哪个好用?

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特别提醒1.对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到*转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1~4μL体积线性PEI转染试剂进行优化。

稳定转染方法1.接种细胞:转染前,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。美国Polysciences提供化学PEI转染试剂。

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对于某些类型的细胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS细胞,在转染前两天铺板可显著提高转入基因的表达水平。如果选择转染前两天铺板,可适当降低铺板密度,以确保转染时细胞的汇合度仍为70~80%。2.对于接触抑制敏感的细胞,可适当降低铺板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情况下,DNA-PEI复合物仍能转染细胞,但是DNA-PEI复合物必须在无蛋白存在的条件下形成。我们推荐使用Opti-MEMITM培养基以达到宜转染效率。其他的无蛋白培养基则需测试与线性PEI转染试剂的兼容性。4.对大多数细胞来而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgDNA使用1.5~4μL体积线性PEIMAX转染试剂进行优化。PEI转染试剂是一种阳离子聚合物转染试剂。福建高性价比PEI转染试剂

PEI转染试剂如何做残留检测?293细胞PEI转染试剂优化方案

线性PEI转染试剂是一种阳离子聚合物,分子量25000,它能与核酸形成复合物,并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性PEI转染试剂广适用于常见细胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。该试剂即使在有血清存在的情况下,它仍然能的将核酸导入细胞。78bio公司提供的线性PEI转染试剂具有如下优点:优越的转染效率,重组蛋白的高表达水平,与含血清的培养基相兼容,低细胞毒性,易于操作?质量控制每批次线性PEI转染试剂均经过转染测试。将eGFP表达质粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus转染试剂转入亚融合状态的HEK-293细胞,转染16h后,超过95%的细胞表达eGFP。293细胞PEI转染试剂优化方案

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