进口PEI转染试剂运输方式
稳定转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用1.5-5μL线性PEI转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批DNA比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。
PEI转染试剂的残留检测方法怎么开发?进口PEI转染试剂运输方式
细胞转染实验是生物医学实验室中常规的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子导入到靶细胞内。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。其中生物转染主要是利用病毒等微生物作为基因导入载体,以慢病毒、腺病毒和腺相关病毒等常见,其侵染效率可以达到90%以上,但常因安全性等问题,很多实验室对其敬而远之。物理转染主要包括显微注射、电穿孔和基因,无论哪一种都需要特定的设备,且一分钱一分货,性能好的价格也都很性感。
四川cGMP级PEI转染试剂PEI转染试剂如何溶解和配置?
注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用QIAGEN或者MN公司去内质粒提取试剂盒)。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者78bio公司血清培养细胞。
细胞分盘:通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基以4×105至8×105细胞/cm2的密度平铺细胞于60mm组织培养皿上(根据实验需要选择培养皿,使细胞贴壁后所占总面积达到培养皿面积的70-90%)。根据细胞贴壁情况于含5%CO2的37℃温箱中孵育8-24h,当细胞贴壁完全后即可开始转染。转染前换入2mL预热的无血清培养基。2.制备PEI-DNA混合物:以60mm组织培养皿用420μL反应总体积为例。准备两支1.5mL离心管,一管将质粒DNA(总量2-8μg为佳)加入240μLHBS中,混匀。另一管中则用HBS将100μM的PEI储存液稀释成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混匀后室温静置20-30min。将这420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述单层细胞的细胞培养基中,轻轻摇动平皿混匀,置于含5%~7%CO2的37℃温箱孵育。注:每次用100μM的PEI储存液前都需要先将其充分混匀,保证所取的浓度一致。3.培养6-10h后更换为37℃预热的含有血清的培养基,继续培养,16h左右可以观测到报告基因的表达。
PEI转染试剂是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后,通过胞吞进入细胞。
线性化聚乙烯亚胺pei25,000,一种高电荷阳离子聚合物,非常容易结合于高电荷阴离子基质。工业应用上线性化pei可改善负电荷染料的物理外观以调整染料的化学特性和增强染料与固相基质的黏附能力,常用作黏附增强剂,作用同多聚赖氨酸(poly-lysine);科研应用上;线性化pei能与dna或其他负电荷生物大分子简单结合,正是这一特性,使得成为一种非常行之有效的载体运输介质(vectorcarrier),即转染试剂。上海曼博生物医药科技有限公司成立于2019年,依托于集团公司泉心泉意深厚的资源和超过400家国内客户群体,生命科学领域一站式供应链体系,以及高风险生物危险材料进出口平台的优势.PEI转染试剂主要用于大规模的蛋白表达和病毒包装。293细胞PEI转染试剂厂家
PEI转染试剂和脂质体转染试剂的区别?进口PEI转染试剂运输方式
准备DNA-PEI复合物:DNA、PEI试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量DNA。用同样的培养基稀释PEI试剂。每1μgDNA需用2-5μL线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL离心管。转染细胞:直接向每个孔中加入DNA-PEI复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴DNA-PEI复合物。转染3h后,添加?体积的包含30%血清的生长培养基。更多关于Polysciences PEI,欢迎咨询上海曼博生物!进口PEI转染试剂运输方式
上海曼博生物医药科技有限公司一直专注于生物医药科技(人体干细胞、基因诊断与zhiliao技术开发和应用除外)领域内的技术开发、自有技术转让,并提供相关的技术咨询和技术服务;计算机软件的开发、设计、制作(音像制品、电子出版物除外)、销售自产产品;实验室试剂及耗材(药品、危险品除外)、化工原料及产品(除危险化学品、监控化学品、烟花爆竹、民用baozha物、易制毒化学品)、仪器仪表、机械设备、电子设备、塑料制品、玻璃制品、办公用品、电子产品的批发、进出口、佣金代理(拍卖除外)。【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】,是一家医药健康的企业,拥有自己**的技术体系。公司目前拥有专业的技术员工,为员工提供广阔的发展平台与成长空间,为客户提供高质的产品服务,深受员工与客户好评。公司以诚信为本,业务领域涵盖血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机,我们本着对客户负责,对员工负责,更是对公司发展负责的态度,争取做到让每位客户满意。公司凭着雄厚的技术力量、饱满的工作态度、扎实的工作作风、良好的职业道德,树立了良好的血小板裂解液,WB自动孵育系统,微流控器官芯片,蓝牙无线标签机形象,赢得了社会各界的信任和认可。
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