芜湖医学膜片钳电生理技术

全自动膜片钳的优势：自动化：抓取细胞、形成封接、破膜等整个实验操作全部自动化，极大的节约实验人员的时间精力。简约化：传统膜片钳所需要的显微镜、显微操作系统、微电极拉制仪，防震台、屏蔽网等全都不需要。效率高：是传统膜片钳实验效率的5-10倍。可靠性：实验结果轻松复制。经济实惠：药物消耗低，每次实验记录较低只需5μl内外液体。零技术门槛：无需膜片钳操作经验，轻松上手。高芯片封接：封接电阻可达1GΩ。确保实验可靠性。兼容性强：可与市场上大多数放大器兼容。应用范围广：除拥有传统膜片钳功能外，还可以对手动膜片钳无法涉及的亚细胞结构进行记录。扩展功能多：配套扩展设备丰富，如內灌流系统、温度控制系统、脂质体制备器等。全自动膜片钳系统技术指标：极大的减少了噪声源，记录数据的电噪音很低。芜湖医学膜片钳电生理技术

膜片钳技术操作方法：实验前准备:打开总电源及稳压电源，打开电脑、放大器，并开启程序软件，新建数据文档并准备开始试验;用P97微电极拉制仪拉制玻璃电极若干备用;检查减震台的减震效果，打开倒置显微镜，监视器和微操备用，取-血细胞将其中玻片取出放入小培美血中，置于倒置显微镜下，于低倍镜下寻找状态良好的细胞，并转入高倍镜下再次确认细胞状态及贴壁情况等，确认细胞后，取电极一根充灌电极内液，弹出气泡，然后套入银丝并插入探头中扭紧旋钮，用注射器管道给电极一点点正压，将电极入水，入水后，查案入水电阻，要在4-8M左右的电极才可以使用，通过调节微操，使电极不断向下接近细胞，待电极尖锐端逐渐变清晰并且将要接近细胞时停止向下，然后把电极移到细胞上方调节放大器上的调零旋钮以保证基线在零水平。南京全自动膜片钳全细胞记录服务膜片钳和电压钳的区别：膜电位固定的方法不同。

膜片钳技术与其他生物检测技术的结合应用：1.膜片钳与光学显微成像技术结合应用：利用激光扫描共聚焦显微镜、双光子显微镜、荧光显微镜等技术可以对细胞进行实时成像研究，将膜片钳技术与光学显微成像技术结合使用不但可以检测细胞的电流变化情况，而且还可以对细胞的电信号传递活动进行成像观察。2.膜片钳与原子力显微镜结合应用：将膜片钳和AFM结合使用的技术可以提高细胞电生理检测的分辨率和灵敏度；而且，在获得细胞电生理信息的同时，还能获取细胞的生物力学性质，从而更很全地研究细胞的生理功能。

膜片钳在通道研究中的重要作用：用膜片钳技术可以直接观察和分辨单离子通道电流及其开闭时程、区分离子通道的离子选择性、同时可发现新的离子通道及亚型，并能在记录单细胞电流和全细胞电流的基础上进一步计算出细胞膜上的通道数和开放概率，还可以用以研究某些胞内或胞外物质对离子通道开闭及通道电流的影响等。同时用于研究细胞信号的跨膜转导和细胞分泌机制。结合分子克隆和定点突变技术，膜片钳技术可用于离子通道分子结构与生物学功能关系的研究。膜片钳的应用：对药物作用机制的研究。

膜片钳电生理技术服务的数据如何处理：1.内面向外式膜片细胞内外和电极内的溶液均可调控,既能较容易地改变细胞内的离子或物质浓度,又能把酶等直接加于膜的内侧面,适宜研究胞内物质对通道活动的影响。但实验中难以改变膜外侧物质,且需浸于低钙液中。常用于研究依赖细胞内钙的离子通道,如钙敏感的钾通道,还可用于细胞内和第二信使与通道的调节作用。2.外面向外式膜片能接触膜的两侧,可以任意改变膜外物质的浓度,有利于研究离子、递质对膜外表面的作用,多用于研究细胞膜外侧受体控制的离子通道。这些受体直接作用于离子通道,而不需经过第二信使系统。因细胞外液容易更换,故加药方便。缺陷是实验中难以改变胞内成分,而且电极管内必须充以低钙液。膜片钳技术的应用范围：对单细胞形态与功能关系的研究。芜湖医学膜片钳电生理技术

膜片钳和电压钳的区别：电压钳技术只能用来研究整个细胞膜或一大块细胞膜上所有离子通道活动。芜湖医学膜片钳电生理技术

膜片钳使用的注意事项：1.向玻璃微电极灌注内液时切勿灌太多（1cm左右为适），以防液体进入银丝底部增加噪声。2.安装玻璃微电极时，电极应与银丝平行，防止刮蹭银丝电极。3.玻璃微电极需先用甲醇浸泡，再用酒精灯微烧两端，使其平滑。4.换液时应时刻观察浴槽，防止液面过低或液体溢出污染镜头，很适液面为微高于出液口。5.浴槽及灌流系统用毕请及时清洗，防止长菌影响实验。6.打雷天气必须禁止膜片钳实验。7.干燥季节请先用手触摸金属框架释放身体的静电。8.每位实验者请在E盘建立自己的文件夹储存数据。芜湖医学膜片钳电生理技术

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