北京植物外泌体

外泌体的临床应用：间充质干细胞是目前较普遍使用的细胞类型，它具有自我更新，多向分化、分泌细胞因子和细胞外囊泡体、免疫调节、来源普遍等特点，在流感病毒的临床诊疗中取得了良好的成果。间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞有着相似的功能，包括修复与再生组织、阻止炎症反应及调节机体免疫，但外泌体相对于间充质干细胞又有许多优势。首先，间充质干细胞来源外泌体更稳定，更好保存，易于管理和控制，可以人为改变其内容物的种类和数量。其次，它们没有活细胞，不会像间充质干细胞那样可能会过多增殖而放大疗效或者病变导致疾病加重；另外，它有可能避免某些针对间充质干细胞的调控问题，间充质干细胞来源外泌体有代替间充质干细胞的趋势。外泌体在免疫调控、肉瘤转移和血管生成以及生物标志物等领域发挥着非常重要的作用。北京植物外泌体

NTA技术已被作为外泌体表征手段之一，相较于其他表征方式NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。大致方法是：将分离的外泌体样本注入纳米颗粒追踪分析仪，用激光光束穿过样本，激光在腔室内与颗粒相互作用时会发生散射，通过装有摄像头的显微镜收集散射光，捕捉外泌体的布朗运动，实现颗粒可视化。然后使用Stokes-Einstein方程来测量粒子的平均速度，继而估算粒子的大小。NTA能够测量粒径10-1000nm之间的颗粒，包含了外泌体50-150nm的径粒范围，但是NTA鉴定需要大于0.5毫升的样品体积以及优化的数据收集和分析参数，另外，NTA比较难区分与外泌体具有相似布朗运动的蛋白质聚集体，因此无法排除其他物质的干扰。上海血液外泌体外泌体功能在研究初期阶段发现是参与细胞成熟过程中去除不必要的蛋白质。

PEG沉淀法分离外泌体：通常通过将无水聚合物，如聚乙二醇（PEG），与样品混合来沉淀外泌体。PEG聚合物竞争性结合水分子，增加疏水性蛋白和脂质分子的相互结合力从而沉淀外泌体，然后通过离心分离外泌体。这种分离的方法快速，简便，可用于各种起始体积（从100μL到几毫升）适合于各种研究和临床设定。然而，这种方法缺乏选择性，PEG聚合物不只会导致外泌体小泡沉淀，还会引起其他细胞外囊泡、细胞外蛋白质和蛋白质聚集体沉淀。因此，在使用这种方法之前，必须进行样品预处理，例如过滤或超速离心，以减少较终的外泌体制剂的污染。

质膜的连续内陷较终导致多泡体的形成，多泡体可与细胞内的其他囊泡和细胞器交叉，从而增加了外泌体成分的多样性。根据细胞来源的不同，细胞外囊泡，包括外泌体，可以包含细胞的许多成分，包括DNA、RNA、脂质、代谢物、胞质和细胞表面蛋白。目前产生外泌体的生理目的尚不清楚，需要进一步研究。一个推测的作用是外泌体可能从细胞中去除多余和/或不必要的成分以维持细胞内环境的稳定。较近的研究也表明外泌体中特定细胞成分的功能、靶向、机制驱动的积累，提示它们在调节细胞间通讯中发挥作用。外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体，通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成。

外泌体的提取分离方法：1、超滤离心：由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体，大于一般蛋白质，利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离，便可获得外泌体。超滤离心法简单高效，且不影响外泌体的生物活性，是提取细胞外泌体的一种新方法。2、磁珠免疫法：外泌体表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以普遍普及。外泌体较有用的特性之一是它们穿过屏障（如细胞质膜和血/脑屏障）的能力。腹水外泌体Dil

外泌体作为蛋白质的药物递送载体。北京植物外泌体

胞外囊泡和外泌体的异质性。细胞外囊泡的两大类是胞外体和外泌体。胞外体通过质膜出芽释放，大小在50~1mm之间。外泌体起源于内泌体途径，通过形成包含ILVs的ESEs、LSEs，较终形成多泡体。当MVBs与质膜融合时，外泌体释放(尺寸范围~40~160nm)。外泌体是一个高度异质性的群体，具有独特的诱导复杂生物学反应的能力。外泌体的异质性可以根据其大小、含量(载物)、对受体细胞的功能影响以及细胞来源来概念化。这些特征的不同组合导致了外泌体的复杂异质性。北京植物外泌体

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