济南荧光染料流式细胞

二、***成像分析：D-荧光素，钾盐，D-PBS,不含钙、镁1、配制溶液使用无菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-荧光素钾盐溶液（15mg/ml），0.22µm滤膜过滤除菌（避光），分装后于-20℃或-80℃冷冻保存，避免反复冻融。使用时4℃融化，实验前平衡至室温（避光）2、注射量取决于注射方式，具体如下：注射方式剂量静脉注射（25-27gauge针头）按10µl/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液腹腔注射（25-27gauge针头）按10µl/g体重浓度，加入相应体积的15mg/ml荧光素工作液肌肉注射（27gauge针头）50µl，浓度为1-2mg/ml荧光素工作液鼻内注射（pipette）50µl，浓度为3mg/ml荧光素工作液3、注射入体内10-20min（待光信号达到**强稳定平台期），再进行成像分析羰花青染料用作 Di 来标记细胞、细胞器、脂质体、病毒和脂蛋白。济南荧光染料流式细胞

Hoechst33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂，它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst33342常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst33342-DNA的激发和发射波长分别为350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序：（1）用PBS或合适的缓冲液制备10～50µMHoechst33342染料。（2）将1/10细胞培养基体积的Hoechst染料溶液加入细胞培养物中（可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲液代替培养基）。（3）在37℃培养细胞10～20分钟。（4）用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。（5）用带有350nm激发波长，460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。济南荧光染料流式细胞Super Fluor 555（效果同Alexa Fluor 555）琥珀酰亚胺酯荧光染料。

琥珀酰亚胺酯（Succinimidylesters）/NHS酯活性荧光染料用于标记抗体，蛋白质，肽，胺修饰的寡核苷酸和其他生物分子上的游离氨基（-NH2）2、马来酰亚胺（Maleimides）活性荧光染料用于标记抗体，蛋白质和肽上的巯基3、叠氮化物(Azides)活性荧光染料通过点击化学法（Click）标记乙烯基4、炔烃(Alkynes)活性荧光染料通过点击化学方法标记叠氮化物5、羧酸(Carboxylicacids)活性荧光染料经碳二亚胺预活化后用于标记胺或用于醇的Steglich酯化6、氨基(Amines)活性荧光染料具有游离氨基的荧光染料，用于与各种亲电子化合物（如活化的酯和环氧化物）偶联。

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，电泳级）储存条件及注意事项4℃避光可保存12个月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔点是18.5℃，使用前请放置到室温充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特点●无毒性：属花菁类染料，容易生物降解，无致*毒性。●灵敏度高：至少可检出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍。●信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。●操作简单：无须脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。●适用范围广：可适用于多种凝胶电泳方法：琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。●使用方便：对分子生物学中常用的酶（如：Taq酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶等）没有抑制作用。●经济：价格比银染便宜。生物发光是利用荧光素酶报告基因在体内表达产生的荧光蛋白与体外注射的荧光素底物发生化学反映产生荧光。

3.粘壁细胞的染色（1）使粘壁的细胞在无菌实验室培养。（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。（3）在盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。（4）在37℃培养细胞2～20分钟，不同的细胞比较好培养时间不同。（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

4.显微镜检测（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。（2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式细胞仪的检测DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的细胞可以分别用经典的FL1，FL2，FL3和FL4流式细胞仪检测。 南京星叶生物荧光染料标记蛋白。细胞荧光染料外泌体

荧光染料，由于灵敏度高，操作方便，逐渐取代了放射性同位素作为检测标记，其应用于荧光探针，细胞染色等。济南荧光染料流式细胞

第二种***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化学公司HoechstAG生产。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是邻苯二甲酰亚胺，具有向A-T富集区插入的趋势，因此后者不常使用。与DAPI相似，此类染料受到紫外线激发并在455nm下发射比较大值，在无结合状态下变为510–540nm。Hoechst染料还具有细胞渗透作用，因此可用于固定细胞和活细胞。与DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色剂碘化丙啶无法透过细胞膜。在细胞培养中，因为该染色剂无法进入完好的细胞内，所以常常被用来区分活细胞和死细胞。碘化丙啶也是一种结合剂，但对不同的碱基没有特异性。在核酸结合态下，其比较大激发波长为538nm，比较高发射波长为617nm。未结合状态下碘化丙啶的比较大激发和发射被移到较短的波长和较弱的强度。它也可以在不改变其荧光特性的情况下与RNA结合。要区分DNA和RNA，必须使用足够的聚合酶。济南荧光染料流式细胞