Recombinant Human VEGFR2/KDR(mFc Tag)
N末端His标签的泛素蛋白(RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB)是一种经过遗传工程改造,在其N末端融合了His标签的泛素蛋白。以下是这种蛋白的一些特点:1.**His标签**:N末端His标签是一种常见的融合标签,用于提高蛋白质的可溶性和便于通过亲和层析进行纯化。His标签通常由6到10个组氨酸(His)组成。2.**重组表达**:这种泛素蛋白通常在大肠杆菌(E.coli)或其他宿主细胞中通过重组DNA技术表达。3.**高度保守**:泛素蛋白是一个76个氨基酸残基的多肽,在真核生物中高度保守。4.**分子量**:由于N末端添加了His标签,重组泛素蛋白的分子量会略大于天然泛素(约8.5kDa)。5.**纯度**:重组泛素蛋白通常具有高纯度(>95%bySDS-PAGE),适合用于各种生物化学和分子生物学实验。6.**溶解性**:His标签的添加可以提高蛋白质在水溶液中的溶解性,便于实验操作。7.**稳定性**:冻干粉形式的重组泛素蛋白在-25~-15℃保存,具有较长的有效期,通常为一年。8.**应用广**:N末端His标签的泛素蛋白可用于多种实验,包括蛋白质泛素化、E3泛素连接酶活性测定、蛋白质相互作用研究等。SpCas9-NLS的应用范围广泛,可用于细胞内的CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑。Recombinant Human VEGFR2/KDR(mFc Tag)
EndoS糖苷内切酶S在抗体药物偶联物(ADCs)研究中的应用主要体现在糖链定点偶联技术上。通过上海药物所的研究,开发了一种新颖的糖链定点ADC制备策略,利用EndoS2这种糖苷内切酶,可以将小分子细胞毒药物“一步”定点连接到抗体的糖基化位点,实现了糖链定点ADC化合物的制备。定点偶联技术相比传统的随机偶联具有更好的方法指数,能够提高ADC的均一性和稳定性,是当前ADC领域的研究热点之一。在抗体的Fc结构域N297位,这是一个保守的糖基化位点,通过在该位点引入细胞物质,可以形成具有优势的糖链定点ADC化合物(glycosite-specificADCs,gsADCs)。此外,EndoS2对多样化的LacNAc修饰显示出良好的兼容性,能够高效获得功能修饰的糖工程抗体,并且可以用于抗体的内吞成像研究及糖链延伸等功能化研究。研究人员通过这种“一步”制备策略得到的糖链定点ADC化合物,在结构均一性、亲水性、体外稳定性以及体外活性方面表现良好,并且在体内瘤抑制活性方面,相比阳性对照ADC化合物,在低载药量的情况下具有更强的抑制效果。EndoS酶的这些应用,不仅展示了其在简化ADC制备流程中的潜力,还有助于推动定点ADC药物的深入发展,为未来的生物药物开发提供了新的思路和方法。Recombinant Canine PDGF R beta/CD140b Protein,His Tag在基因编辑中,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或编辑工具的克隆,减少克隆过程中的非目标突变。
EndoS糖苷内切酶在抗体药物偶联物(ADCs)的制备中发挥着至关重要的作用。EndoS是一种特异性的内切糖苷酶,它能够从IgG重链的N-糖基中切割N-连接的糖链。这种特异性使得EndoS在改造抗体的糖链结构时非常有用,尤其是在开发定点ADCs时。在ADCs的制备过程中,EndoS的作用主要体现在以下几个方面:1.**糖链切割**:EndoS能够特异性地水解抗体Fc片段上的N-糖链,为后续的糖链改造和药物偶联提供条件。2.**糖链改造**:EndoS可以用于去除抗体上的原有糖链,然后通过酶的催化作用,将特定的糖链结构重新连接到抗体上,实现糖链的定点修饰。3.**定点偶联**:通过EndoS的催化作用,可以将小分子细胞毒药物通过特定的糖链结构“一步”定点连接到抗体的糖基化位点,简化了ADCs的制备流程。4.**提高ADCs的均一性和稳定性**:EndoS介导的定点偶联技术有助于获得结构均一性更好、稳定性更高的ADCs,这对于提高药物疗效和减少副作用至关重要。5.**增强疗效**:利用EndoS进行的定点偶联可以提高ADCs的体内瘤抑制活性,即使在低载药量的情况下也能保持高效的抗瘤效果。
酵母重组表达的N-糖苷酶F(PNGaseF)在实际应用中具有以下优势:1.**高比活性**:具有高达750,000U/mL的比活性,这表明该酶在催化反应中具有很高的效率。2.**快速反应**:新型的FastPNGaseF能在数分钟内完成彻底且无偏好性的去糖基化,缩短了实验时间。3.适用性:PNGaseF可以用于天然或变性条件下的糖蛋白或糖多肽的去N-糖基化修饰。4.**无其他糖苷酶活性**:该酶专一性高,无其他糖苷酶活性,确保了实验结果的准确性。5.**His标签**:带有His标签,便于通过亲和层析进行纯化和检测。6.**稳定性和储存条件**:在含有50%甘油的储存缓冲液中,-15~-25℃保存,有效期长达1年。7.**简化的实验流程**:FastPNGaseF简化了实验流程,减少了实验时间,同时保持了灵敏度和重复性。8.**兼容性好**:去糖基化后的产物可以直接用于下游的色谱或质谱分析,无需额外的纯化步骤。9.**无偏好性**:能够迅速且无偏好性地去除所有的N-糖链,确保了获得的糖链分布能够表示抗体的正确组成。Taq DNA Polymerase 能够在相对较高的温度下保持稳定,其适催化温度在75-80°C。
IdeSProtease是一种免疫球蛋白G(IgG)特异性降解酶,它能够在IgG的铰链区下方的一个特定位点进行切割,产生F(ab')2和Fc片段。这种酶是通过大肠杆菌(E.coli)表达系统重组表达生产的,并且经过分子改造,使其具有更高的酶活和更广的底物特异性。在生产过程中,确保IdeSProtease符合GMP(良好生产规范)标准,需要进行以下步骤:1.**分子改造**:通过分子生物学技术对IdeS进行改造,增强其稳定性和比活性。2.**大肠杆菌表达系统**:利用大肠杆菌表达系统进行IdeS的重组表达,确保无动物源性成分,减少病毒污染风险。3.**纯化**:通过高度纯化过程,确保IdeS的纯度达到≥95%。4.**酶活定义**:1个酶活力单位定义为在37°C条件下,30分钟内酶切1μg重组单克隆IgG所需的酶量。5.**质量控制**:每批产品都经过严格的质量控制,以确保产品批间稳定性和高稳定性。6.**储存条件**:采用适当的储存条件,如-30℃至-10℃冻存,确保产品在有效期内保持活性和稳定性。7.**微生物学安全性检测**:进行无菌检测、体内有毒物质的检测、抗生物质残留检测、宿主细胞蛋白残留检测和病毒安全性检测,确保产品符合微生物学安全性要求。
在基因编辑过程中,Pfu DNA Polymerase 可用于合成高质量的单链或双链DNA修复模板。Recombinant Human VEGFR2/KDR(mFc Tag)
EndoS酶在抗体药物偶联物(ADCs)研究中的具体应用主要体现在糖链定点偶联技术方面。根据上海药物研究所的研究进展,EndoS酶被用于实现定点ADC化合物的“一步”制备,这是一种新颖的糖链定点ADC制备策略。该策略利用了新颖截短型糖结构的药物-连接子和野生型糖苷内切酶EndoS2,将小分子细胞毒药物直接定点连接到抗体糖基化位点,从而克服了传统糖链定点ADC制备策略的限制。具体来说,研究人员通过筛选发现,EndoS2酶可以将二糖底物LacNAc转移至去糖抗体N297位糖基化位点,并且LacNAc半乳糖6号位唾液酸化修饰不影响EndoS2的转糖基化活性。这一发现使得EndoS2和LacNAc的组合可以直接实现野生型抗体的糖基化改造,且EndoS2对多样化LacNAc修饰的兼容性,可以高效获得多样性功能修饰的岩藻糖化或去岩藻糖化的糖工程抗体。此外,研究人员还利用叠氮化修饰的LacNAc底物实现了抗体糖基化位点的“一步”叠氮化修饰,并通过点击化学反应偶联药物-连接子,实现了“两步”制备得到定点ADC化合物。